髓过氧化物酶双抗体夹心光激化学发光检测法的建立.pdfVIP

检验医学2012年4月第27卷第4L a !a0【望 ! P ! !： · 291 文章编号 ：1673—8640(2012)044)291_05 中图分类号 ：R446．61 文献标志码 ：A 髓过氧化物酶双抗体夹心光激化学发光检测法的建立 韩海荣 ， 梁 颖 ， 赵卫国 ， 沈 茜 (1．第二军医大学附属长海医院实验诊断科，上海 200433；2．第二军医大学附属长海医院心内科， 上海 200433；3．博阳生物科技(上海)有限公司，上海 201210) 摘要：目的 建立一种定量检测血浆中髓过氧化物酶 (MPO)浓度的双抗体夹心光激化学发光检测法 (LiCA)，用于心血管疾病的辅助诊断。方法 采用棋盘格滴定法，从针对MPO抗原的12株单克隆抗体 (McAb) 中筛选出最佳双抗体组合 (1株McAb包被发光微粒，另 1株McAb进行生物素化)，进而探索2种抗体最适反应 浓度及MPOLiCA的最适反应条件，评价该法的重复性、敏感性、抗干扰性及回收率，并与经典的CardioMPO 酶 联免疫吸附试验 (ELISA)进行平行比较分析。结果 筛选到2株最适McAb，并与链霉亲和素包被的感光微粒连 接，建立用于MPO定量测定的LiCA。该法敏感性为 1．76ng／mL，批内变异系数 (CV)和天间CV分别为2．73％、3． 76％，平均回收率为 102．5％±8．6％，与CardioMPO ELISA具有 良好的相关性 (r=0．961，P0．01)，正常参考范 围为13．16～128．79ng／mL。结论 成功建立了一种用于MPO定量检测的LiCA，该法具有高的敏感性和好的稳定 性 ，试剂有效期长，并且操作流程简便，耗时短，在心血管疾病的辅助诊断中具有很好的应用前景。 关键词：髓过氧化物酶；光激化学发光检测法；酶联免疫吸附试验；单克隆抗体 The establishment of double·antibody sandwich light initiated chemiluminescence assay for the determinationofplasmamyeloperoxidase HANHairong，LIANG ，ZHAOWe o，SHENQian． (1． ExperimentDiagnosisDepartme nt，ChanghaiHospital，SecondMilitaryMedicalUniversity，Shanghai200433，China ； 2．DepartmentofCardiology，ChanghaiHospital，SecondMilitaryMedicalUniversity，Shanghai200433，China；3． BeyondDiagnostics(Shanghai)CompanyLimited，Shanghai201210，China) Abstract：0hiective Toestablishaquantitativedouble—antibodysandwichlightinitiatedchemiluminescence assay(LiCA)forthedeterminationofplasmamyeloperoxidase(MPO)concentrationinordertoassisttodiagnose cardiovascnlardiseases．Methods From 12anti—MPOmonoelonalantibodyfMcAb)，theoptimum double．antibody combination(oneMcAbcoatedonluminescenceparticlesandtheotherMcAbconjugatedwithbiotin)waspickedoutby the checkerboard titration．The suitable reaction concentration and conditionswere analyzed．Consequently．the repeata