植物乳杆菌代谢产物和Ca^2＋诱导人舌鳞癌CAL-27细胞凋亡的研究.pdfVIP

·16 · 黑龙江医药科学 2013年4月第36卷第2期 植物乳杆菌代谢产物和Ca+诱导人舌鳞癌CAL一27细胞凋亡的研究 张秀静，王心或 ，张国梁，赵 华 ，刘 志，徐 峰，关 键 (佳木斯大学第二附属医院，黑龙江 佳木斯 154002) 摘要：目的：探讨植物乳酸杆菌发酵乳清蛋 白获得的代谢产物以及 Ca。对人舌鳞癌CAL一27细胞生长抑制作用和诱导细 胞凋亡作用。方法：植物乳杆茵23201经复原乳清菊糖培养基培养，制备相应的代谢产物1(LPM1)。利用草酸钠溶液沉淀LPM1 中的 Ca。获得不含 Ca 的代谢产物 (LPM1一F)；采用 MTT法检测不 同浓度的 LPM1和 LPM1一F对 CAL一27细胞体外增 殖的抑制作用；通过吖啶橙染色法观察凋亡细胞 的形态学变化 ；采用 Annexinv--FITC／PI双染试剂盒检测早期凋亡率。结果： 不 同浓度LPM1和LPM1一F分别作用CAL一27细胞24h，最大抑制率分别达到(48．81土4．96)％和 (56．70±2．33) ；荧光显 微镜下观察，凋亡细胞皱缩，凝聚呈新月形或马蹄形，贴壁不 良；流式细胞仪结果显示：经LPM1和 LPM1一F处理的CAL一27 细胞早期凋亡率均高于对照组 结论 ：植物乳酸杆菌代谢产物体外抑制 CAL一27细胞生长 ，呈剂量 的依赖性，并且诱导细胞凋 亡 ，其中Ca 对人舌鳞癌CAL一27细胞生长和凋亡无影响。 关键词 ：人舌鳞癌细胞 ；增殖 ；凋亡 ；植物乳酸杆菌；代谢产物 中图分类号：R739．86；Q255 文献标识码 ：A 文章编号：1008—0104(2013)02—0016—02 大量的实验研究表明乳酸杆菌及其代谢产物具有降低 1．4方法 胆固醇、抗感染、抗毒素和抗癌作用，并与细胞凋亡和细胞分 1．4．1 植物乳杆菌23201的培养及代谢产物的制备 化 的调控有关[1 ]。植物乳杆菌 (Laetobaeillusplantarum)是 植物乳杆菌23201经 MRS培养基连续扩增培养30：后 ， 最常见的乳酸杆菌之一，是一种被公认的可安全使用的益生 离心，用与培养基等体积的无菌lOmM CaC1的生理盐水洗 菌，在发酵乳制 品的生产 中起着重要 的作用 。具有产生细胞 涤菌体2次，离心弃去上清液 ，用上述生理盐水悬浮菌体制备 壁结合蛋 白酶的能力，水解胞外蛋 白质产生多肽和氨基 成菌悬液。接种于复原乳清菊糖培养基中，使菌体终浓度为 酸…，同时在代谢过程 中产生短链脂肪酸 。Ca。是维持人体 1OD／mL，于4O℃、100rpm振荡培养48h，离心取上清液 ，将上 正常生理功能所必需的重要元素之一，同时 Ca 信号途径与 清液等分为2份 ，其 中一份用真空冷冻机直接获得冻干粉 ，即 癌症 的发生发展及凋亡有着密切 的关系_5]。胞外 Ca 在一 获得植物乳杆菌代谢产物 LPM1，一2O℃保存待用 。另一份 些化学治疗剂诱导癌细胞凋亡 中起着重要 的作用[7]。本课题 用0．25M草酸钠溶液沉淀 Ca ，去除上清液 中的Ca ，经真 组通过一株植物乳杆菌23201在含有碳酸钙 的复原乳清菊糖 空冷冻干燥获得冻干粉 ，即获得去除Ca”的植物乳杆菌代谢 培养基 中生长代谢 ，制备得到富含 Ca外的植物乳杆菌代谢产 产物 LPM1一F，一20℃保存待用。 物 (Laetobacillusplantarummetabolites，简称 LPM1)和去除 1．4．2 CAL一27细胞培养及传代 Ca 的植 物乳杆菌代谢 产物 (LPM1一Ca”一Free，简称 CAL一27细胞株培养于含 10％灭活胎牛血清 DMEM 培 LPM1一F)。本研究 的 目的在于通过体外培 养实验评价