凡纳滨对虾TCP-1-Beta基因的克隆及其与耐寒性状的相关性.pdfVIP

第35卷 第am 水 生 生 物 学 报 VO1．35，NO．4 2011年 7月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA JU1Y． 20l1 D0I：10．3724／SPJ．1035．2O11．00604 凡纳滨对虾TCP-1-Beta基因的克隆及其与耐寒性状的相关性 彭金霞 殷 勤 ，2 崔 亮 王志伟2 李 奎2 陈晓汉 (1．广西壮族 自治区水产研究所，南宁 530021；2．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100094) 摘要：为研究凡纳滨对虾耐寒性状的分子机理，研究克隆了凡纳滨对虾耐寒相关基因 P——Beta并对其与 耐寒性状的关系进行了研究。根据 电子克隆所得序列设计引物，采用 RT-PCR方法克隆得到长 1691bp的凡 纳滨对虾 TCP—J—Beta基因序列，其 中包括 1608bp的完整开放阅读框，编码 535个氨基酸残基。然后，运用 荧光定量 PCR对 C|尸一一Beta基因进行时空表达谱的分析：组织表达谱的结果显示，该基因在凡纳滨对虾肝 胰腺组织 中表达量最高；不同低温处理下的表达结果显示，在 280C和 15。c处理下基 因表达量无显著变化， 13℃开始呈上调表达，11℃时表达量升高；13℃低温处理发现该基因在24h内表达量无显著变化，但36h后表 达量显著升高。采用PCR．RFLP方法对 216尾凡纳滨对虾 TCP一一Beta基因进行了SNP多态性检测，并将其 与耐寒性状进行了关联分析。在该基因编码区第 420碱基上发现 G／A突变，方差分析结果表明该位点的不 同基因型与耐寒力指标 CDH值相关(P0．05)，其中GG基因型的耐寒能力 比AA基因型强。 关键词：凡纳滨对虾； 尸一一Beta；SNP；PCR—RFLP；耐寒力指标 CDH值 中图分类号：Q781 文献标iR~i-q：A 文章编号：1000—3207(2011)o40604—06 T复合蛋 白1(T-complexpolypeptide一1，TCP．1) 对虾，为广温广盐性热带虾类，是 中国养殖规模最 属于热休克蛋 白 60家族(Hsp60family)中的成员， 大的对虾品种。但近年来对虾主养区屡次遭遇寒灾， 广泛存在于真核生物界，在进化上高度保守。在正 给对虾养殖业带来 巨大的经济损失。低温成为制约 常状态下，热休克蛋 白行使分子伴侣功能，参与细 凡纳滨对虾养殖规模和时间的重要因素，因此培育 胞凋亡和蛋白质代谢等重要生理活动f11]。生物体受 耐低温的凡纳滨对虾品种能扩大产业规模，增加对 到热激时正常的蛋 白合成受到抑制，而一类特殊 的 虾养殖时间，带来 巨大的经济效益。鉴于 TCP．1基 蛋 白却得到诱导，这类蛋白即为热激蛋 白，或称热 因在耐寒 中的潜在作用，对其进行低温表达和分子 休克蛋白。尽管热休克蛋白是在高温胁迫研究中发 标记方面的研究将为分子辅助耐寒品种选育提供 现的，但是后来发现在低温、低氧、创伤等环境下， 参考 同样会有热休克蛋白的合成。这一发现暗示着热休 1 材料与方法 克蛋白功能具有多样性，目前已经有研究表 明热休 克蛋白与生物体耐寒能力有关[45】。南极抗冻鱼和 5 1．1 材料来源 种热带鱼的差异芯片结果显示，南极抗冻鱼 中的 实验对虾是广西水产研究所广西南美白对西遗 TCP．1基因表达量显著高于热带鱼类 ]。因此，推测 传育种中心养殖的无特定病原的凡纳滨对虾，养殖 该基因可能与耐寒能力相关。 时间2个月，对虾规格 5— 10g。于实验室暂养 7d 凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)亦称南美 白 后进行降温处理(水温从28~C降至 1l℃，每12h降低 收稿 日期：2010-06—09；修订 日期：2011．02．19 基金项目：国家科技支撑计划项 目(2o08BADB9B03)；现代农业产业技