HIV初筛实验室ELISA试验的注意事项.pdfVIP

论 著 ·临 床 辅 勋 检 查 CHINESE C0 MMLINlTY 0(C )Rs HIV初筛实验室 ELISA试验的注意事项 要注意同一标本先做免疫后做生化。 蒸发，应加盖或用贴封胶贴住。若用恒温 刘林涛 箱，ELISA板应放在温盒 内，温盒 内需放 551300贵州黔南布依族苗族 自治州贵定 试剂的准备 人一定量的水，再放人纱布，把 EIISA板 主要是第三代 EIISA试剂，第 四代 放在湿纱布上，让湿盒 内的水刚好达到板 县人 民医院 试剂也已逐步推广，与第三代 HIV一1／2 高的1／3。湿盒应先放在保温箱 中预温 doi：10．3969／j．issn．1007—614x．2012 试剂相比，检m时间提前3—9．1天，其优 至规定的温度，温育时，反应板都不宜叠 33．186 点在于可以同时检测抗原抗体 ，并缩短了 放，以保证各板的温度都能迅速平衡。试 窗口期检测时间。选择试剂不但要考虑 验时室温应严格限制在规定范围内，标准 日前实验室作为HIV初筛检测主要 灵敏度 、特异性和精密度，还要注意稳定 室温温度是指 20～25℃，需要注意的是 是HIV病毒抗体检测。由于它的灵敏度 性 、简便性和安全性。可以参考上级部门 温育的温度和时间应按规定力求准确，所 和特异性高，而且方法相对简单 、成熟，更 对试剂的评价结果来选择试剂 ，因为这具 以一个人操作时，不要再同时检测其他免 重要的是 HIV抗体在病毒感染后，除早 有权威性和公正性。 疫项 目。 期短暂的窗 口期外的整个生命期问长期 试剂从冰箱取m后应在室温下放置 稳定地存在并可被检测到。 一 段时间后使用，良好 的ELISA板应该 洗 涤 在 HIV初筛实验室，ELISA是常用的 是吸附性能好、空白值低，孔底透明度高， 洗涤是否彻底，决定着实验的成败 ， 抗体筛查方法。EIISA是一种免疫测定， 各板之问、同一板各孔之间性能相近。在 ELISA就是靠洗涤来达到分离游离的和 通常采用双抗原夹心法。其原理为预包 ISA中最好使用试剂盒 自带的浓缩洗 结合的酶标记物的目的。通过洗涤，以清 被高纯度重组 HIV(1+2型)抗原，可与 液，经 1：20稀释后使用。 除残留在板孔中游离的物质，和大量特异 样品中抗 HIV抗体反应，同时加入 HRP 性地吸附的干扰物质。聚苯 乙烯等塑料 标记HIV(1+2型)抗原，然后用 TMB底 加 样 对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时 物作用 色。通过酶标仪检测 吸光度 JJu样分为 步，即加标本，酶结合物 义应把这种非特异性吸附的干扰物质洗 (OD佰)从而判定样品中HIV抗体的存 fllJ氐物 {：一步的加 样都应垂直加在 涤下来，可以说 ，在ELISA操作中，洗涤是 在与否。 ETIS、扳孔的底部，并要注意不要溅出和 最主要的关键技术，应引起操作者的高度 El。ISA试验的步骤对检测结果秆很 『，{气泡吸嘴，不要碰到孔壁 ，避免产 重视，操作者应严格按洗板机的标准 SOP 大的影响，每个步骤均应认真负责才能允 生假阳性。 操作 ，根据洗涤要求设置好各项数据 ，不 分发挥 ELISA灵敏和特异的优点。如不 加标本使用的微量加样器必须是校 得马虎。所以洗板机是 HIV检测最常用 注意，有可能导致显色不全、花板等结果。 准过的，建议使用 (50—1001~