分子生物学技术在瘤胃厌氧真菌分类多样性与定量分析研究中的应用.pdfVIP

中国蓉学通报 , : 分子生物学技术在瘤胃厌氧真菌分类多样性与 定量分析研究中的应用 沈博通 ,曹阳春 ,杨红建。 中国农业大学生物学院,北京; 中国农业大学动物科学与技术学院,北京 摘 要:栖居在瘤胃中的厌氧真菌对饲料纤维的降解具有重要的促进作用。围绕瘤胃厌氧真菌的生物学 分类以及生活史,对国内外研究进展进行了综述分析。核糖体的序列分析、限制性片段长度多态 性 、核糖体间隔基因自动分析等分子生物学技术的快速发展与应用为厌氧真菌分类多 样性研究开辟了新的途径。这些快速、易于操作的新技术,因其所具有高度灵敏性和特异性,而被广泛 用于对瘤胃厌氧真菌的分类鉴定和系统进化分析中,与此同时,实时定量技术目前已经被广泛接 受并用来定量监测瘤胃微生态环境下的真菌生物量。 关键词:瘤胃;厌氧真菌;生物多样性;分子生物学技术 中图分类号: 文献标志码: 论文编号: :, , , , ;, : . ,.,, , .,, ? .: ;; ; 酶,可以促进粗纤维的降解。大量研究证明,虽然厌氧 引言 厌氧真菌在土壤、低洼湿地和垃圾填埋场等厌氧 真菌在瘤胃中栖息数量少于细菌和原虫,但其降解粗 生态系统中担当着重要的角色,在反刍家畜瘤胃等 纤维的能力远远高于细菌和原虫。鉴于厌氧真菌培养 微生态环境同样栖息有厌氧真菌,这些真菌可通过孢 本身存在的技术难度,有关瘤胃厌氧真菌分类多样性 子囊和营养菌体等部位分泌一系列饲料细胞壁降解 方面的研究报道仍十分有限。现代分子生物学技术的 基金项目:国家自然科学基金委面上项目 ;北京市大学生科学研究与创业行动计划。 第一作者简介:沈博通,男,年出生,吉林长春人,在读本科生。通信地址: 中国农业大学北京市海淀区圆明园西路 号中国农业大学 信箱, ? :.。 通讯作者:杨红建,男, 年出生,副教授,博士生导师,博士,研究方向:动物营养生理生化与饲料资源开发。通信地址: 北京市海淀区圆明 园西路 号中国农业大学动物科学与技术学院, ? : .。 收稿日期: . ,修回 期: ? 。? 中回农学通报://. . . 快速发展和应用促进了瘤胃厌氧真菌分类多样性的研属厌氧真菌】。 究。 属真菌菌株形态学特征:多中心菌体, 瘤胃厌氧真菌的分类学特征 单鞭毛或双鞭毛游动孢子, 年被 等发现, 瘤胃真菌由于是生物圈中的一种严格厌氧的微生 包括 牛 。 物,早期研究曾被误认为是 一种单鞭毛原生动物 。 厌氧真菌的生活周期 目前,普遍认为瘤胃真菌生活周期 见图 包括 首次成功地培养了这种微生物,后因发现该微 生物细胞壁中有几丁质存在,并将此微生物界定为 具有鞭毛和运动能力的游动孢子阶段和附着在饲料碎 片上与消化相关的菌丝体阶段。游离孢子可存活 亚门中的 纲。此分 类依据被和通过真菌 的序列测~,孢子在孢子囊内逐渐成熟,并随孢子囊破裂 而释放出来后,附着在纤维性饲料上,在降解饲料的 定进一步证实。截至目前的研究发现,在绵羊、水牛等 超过 种草食动物的消化道中均存在厌氧真菌,文献 同时,逐渐形成新的菌丝体 。当这些真菌随宿主动 报道分离获得的真菌共计 个属 余个种之多。目 物粪便排出体外后,其生活史主要由 个阶段组成,即 前,比较通用的分类为 】: 游动孢子阶段、菌丝体阶段和具有耐氧结构的耐受性 真菌界鞭毛亚菌根阶段 “。 壶菌纲 目科 属、 、、、 和 属真菌菌株形态学特征:单中心菌 游动孢 体,多鞭毛游动孢子,分布广泛,纤维状的假根。据文 子囊 献报道,自绵羊、水牛、山羊、奶牛、黑貂、白臀野牛等 动物胃肠道食糜或粪便中分离到的此类厌氧真菌鉴定 种 包 括 , , ,。中国农业大学岳群也从荷斯坦阉牛瘤胃液 中筛选到两株 属厌氧真菌 。 具有假椴的成熟孢子囊 属菌株形态学特征:单中心菌体,单鞭 图 单中心厌氧真菌生活史示意图 毛游动孢子,纤维状的假根,据 综述报道在不 分子生物学技术在厌氧真菌分类鉴定中的应用 同草食动物中发现的厌氧真菌包括 . 真菌序列分析技术 绵 羊,马 , . . 真菌的基因组序列结构与组成 真菌的核 大 象 ,驴 , 糖体为,构成真核生物核糖体的共有 种,即 鹿 ,山 羊 ,、 . 、和的。核糖体核糖核酸基因及 ; 马。 其相邻的间隔区合称为核糖体 。 属菌株形态学特征:菌体多中心,多 基因组由高度保守区和可变区组成,是一个高度重复 鞭毛游动孢子,纤维状的假根,包括并有转录活性的基因家族㈣。如图 所示,真菌 和度牛和水牛【。 包括以下几个区段 按 ’一 ’方向叙述 : 非转录区属菌株形态学特征:菌体多中心或单 ,简称; 外转录间隔 中心,单鞭毛游动孢子,球形支架,包括 绵羊 , 马 。 区 ,简称 ; 基因,简称 ; 内转录间隔区 属菌株形态