抗IgE单链抗体在大肠杆菌中可溶性高效表达条件研究.pdfVIP

中 国 生 物 工 程 杂 志 C h i n a B i o t e c h n o l o g y , 2 0 1 2 , 3 2 ( 1 1 ) : 2 3 ? 2 8 抗 I g E 单 链 抗 体 在 大 肠 杆 菌 中 可 溶 性 高 效 ? 表 达 条 件 的 研 究 1 , 2 2 2 2 2 ? ? 刘 启 刚 代 云 见 张 勇 侠 王 保 成 王 明 蓉 ( 1 中 国 医 药 集 团 总 公 司 四 川 抗 菌 素 工 业 研 究 所 成 都 6 1 0 0 5 2 2 成 都 生 物 制 品 研 究 所 有 限 责 任 公 司 成 都 6 1 0 0 2 3 ) 摘 要 目 的 : 以 抗 I g E 单 链 抗 体 ( a n t i ? I g E s c F v ) 为 研 究 对 象 , 以 大 肠 杆 菌 周 质 高 效 表 达 可 溶 性 单 链 抗 体 为 目 标 , 研 究 不 同 宿 主 细 胞 、 培 养 基 及 培 养 条 件 对 可 溶 性 单 链 抗 体 表 达 产 量 的 影 响 。 方 法 : 构 建 R o s e t t a ( D E 3 ) 、 B L 2 1 ( D E 3 ) 和 S o l u B L 2 1 ( D E 3 ) 三 种 大 肠 杆 菌 工 程 菌 , 研 究 不 同 碳 源 、 氮 源 、 培 养 基 配 方 和 培 养 条 件 对 可 溶 性 抗 I g E 单 链 抗 体 产 量 的 影 响 。 结 果 : 携 带 抗 I g E 单 链 抗 体 基 因 的 p E T ? I g E 2 6 质 粒 在 新 型 宿 主 S o l u B L 2 1 ( D E 3 ) 中 的 表 达 产 量 明 显 优 于 传 统 的 R o s e t t a ( D E 3 ) 和 B L 2 1 ( D E 3 ) 宿 主 菌 。 经 碳 氮 源 筛 选 、 培 养 基 和 培 养 条 件 的 优 化 , 确 定 S o l u B L 2 1 ( D E 3 ) 工 程 菌 高 效 表 达 可 溶 性 重 组 抗 体 的 最 佳 培 养 基 为 : 以 M 9 培 养 基 为 基 础 , 添 加 0 . 5 % 葡 萄 糖 、 0 . 6 % 酪 蛋 白 胨 和 0 . 0 2 % 微 量 元 素 。 最 佳 的 培 养 条 件 为 : 以 L B 为 种 子 培 养 基 , 3 7 ℃ 过 夜 培 养 至 O D 为 3 . 0 左 右 , 以 6 0 0 5 % 接 种 量 接 种 于 最 佳 发 酵 培 养 基 中 ; 接 种 后 细 胞 生 长 条 件 : 3 7 ℃ , 2 6 0 r / m i n , 培 养 3 . 5 h ; 细 胞 诱 导 培 养 条 件 : 当 O D 为 1 . 5 ~ 1 . 8 时 , 降 温 至 2 5 ℃ , 添 加 0 . 1 m m o l / L I P T G , 2 2 0 r / m i n 继 续 培 养 1 6 h 。 6 0 0 经 抗 原 E L I S A 检 测 , 抗 I g E 单 链 抗 体 的 可 溶 性 表 达 量 比 原 始 对 照 组 提 高 了 5 倍 。 结 论 : 通 过 对 宿 主 细 胞 类 型 的 筛 选 、 培 养 基 及 培 养 条 件 的 优 化 , 可 以 显 著 提 高 重 组 单 链 抗 体 在 大 肠 杆 菌 周 质 空 间 内 的 表 达 产 量 。 该 研 究 结 果 不 仅 为 规 模 化 制 备 抗 I g E 单 链 抗 体 提 供 了 技 术 支 持 , 同 时 为 大 肠 杆 菌 生 产 重 组 小 分 子 抗 体 提 供 了 有 价 值 的 参 考 。 关 键 词 可 溶 性 抗 体 产 量 I g E 单 链 抗 体 大 肠 杆 菌 表 达 条 件 优 化 中 图 分 类 号 Q 7 8 免 疫 球 蛋 白 E ( I g E ) 是 介 导 I 型 变 态 反 应 的 抗 体 。 疫 原 性 , 会 使 人 体 产 生 较 强 的 人 抗 鼠 抗 体 ( H u m a n a n t i ? 特 应 性 哮 喘 、 鼻 炎 、 食 物 过 敏 、 特 应 性 皮 炎 等 均 属 I 型 变 m o u s e a n t i b o b y , H A M A ) 反 应 。 单 链 抗 体 ( S i n g l e c h a i n f r a g m e n t v a r i a b l e , s c F v ) 是 具 有