果蝇卵巢管经固定和染色后的荧光效果研究.pdfVIP

中圃雇学亟疆, :? 果蝇卵巢管经固定和染色后的荧光效果研究 王 冰,王 晶,李纪同,杨磊,张永忠 聊城大学生命科学学院,山东聊城 摘 要:为进一步研究不同生物材料的荧光染色特性,开辟荧光组织学的新领域,以黑腹果蝇卵巢为实验 材料,解剖取出雌果蝇的卵巢管,通过不固定直接压片、用多聚甲醛固定液固定后压片及固定后再用不 同染料染色后压片这 种方法处理后,分别在明场 白光 、绿色激发光、蓝色激发光和紫外激发光下观 察、拍照。发现果蝇的卵巢管具有弱的自发荧光性,多聚甲醛可赋予卵巢管明显的荧光特性,固定后的 标本经不同染料染色后荧光性分别出现不同的显著变化。通过综合分析认为,常规固定剂及染色剂可 以分别赋予果蝇卵巢管中的生殖细胞和体细胞各自不同的荧光特性,也可赋予细胞内不同物质成分以 各自不同的荧光特性。不同固定、染色剂赋予生物组织细胞新荧光特性的研究在组织学中将会有重要 而广阔的应用前景。 关键词:荧光组织学;果蝇;卵巢管;自发荧光性;固定剂 中图分类号: 文献标志码: 论文编号:?, , ,, , , :, . , :,,.,, , . ,, . , : ,..: ; ; ; ;已经在多数生物学及相关学科的实验室得到普及 。。 引言 随着科学的发展和科研条件的改善,荧光显微技术 但是,到目前为止,荧光显微镜 卅还主要是用于对特殊 基金项目:山东省自然科学基金项目“动物线粒体遗传机理研究” ;国家自然科学基金项目“线粒体有害突变在动物世代传递中被 淘汰的机制” 。 第一作者简介:王冰,女, 年出生,山东临清人,硕士研究生,主要从事细胞生物学。通信地址: 山东聊城湖南路 号聊城大学生命科学学 院, : ? , ? : .。 通讯作者:张永忠,男,年出生,山东聊城人,教授,博士,主要从事细胞生物学及生物化学教学及研究。通信地址:山东省聊城市湖南路 号聊城大学生命科学学院, : ? , ? : .. 。 收稿日期: ? ,修回日期: ? 。王 冰等:果蝇卵巢管经固定和染色后的荧光效果研究 荧光材料 、荧光标记的抗体 、荧光蛋白或荧光 或 . % 啶橙染色,再用冲洗 次,每次 染色的某些分子进行观察。尚很少见到把荧光显微技,用 %的甘油封片。 注:甘油基本没有荧光, 术用于普通生物细胞、组织的涂片、装片、压片、石蜡切 而常用的封片剂,如中性树胶等则有荧光。所以选用 片” ”、冰冻切片,以及病理材料的组织切片。 等方面%的甘油作为封片剂来研究不同处理后各种生物材 的显微观察。这不仅极大地限制了荧光显微镜的应用 料的荧光特性。 分别在明场、绿色激发光、蓝色激发 范围,也限制了细胞、组织形态结构研究领域的发展。 光、紫外激发光下观察卵巢管及其中各类细胞的轮廓 致使近几十年来生物学和医学在形态结构领域的研究 及亚细胞结构的荧光情况,并拍照。 沦为比较落后的范畴。而将荧光显微技术应用于普通 结果与分析 的细胞、组织显微结构领域的研究,不仅将为本学科领 . 果蝇卵巢管具有较弱的自发荧光 域的研究带来新的生机,而且还将为其在农学、医学等 不经固定和染色的果蝇卵巢管自发荧光比较 领域的应用带来难以估量的潜在价值。 弱。不同发育时期的生殖囊及卵母细胞表现出不同的 因此,本实验以果蝇卵巢管为材料,选用多聚甲醛 自发荧光特性。在明场下仅能观察到卵巢管各生殖包 固定液进行固定,然后分别用苏木精、伊红、甲苯胺蓝、 囊中滋养细胞及卵母细胞的轮廓 图 ,。绿色光 固绿、吖啶橙等染色剂对卵巢标本进行染色;分别在明 激发后卵巢管几乎不发出荧光,卵巢管几乎与背景呈 场 白光 、紫外激发光、蓝色激发光和绿色激发光 种 同样的颜色 红色 ,只能看到卵巢管很淡的轮廓 图 情况下对压片标本进行明场及荧光观察。在果蝇卵巢 ,。蓝色光激发后,卵巢管出现较弱的绿色荧光, 管及生殖包囊荧光染色特性方面获得了较为系统的第 整个卵巢管的轮廓比较清晰,卵巢管中各生殖包囊的 一 手资料,为进一步研究不同生物材料的荧光染色特 轮廓也清晰可见,在较大的生殖包囊中的卵母细胞中 性做了一次探索。 则发出稍微较亮的绿色荧光 图 ,。经紫外光激 材料与方法 发后只在较大的生殖包囊中的卵母细胞里可见有比较 . 材料 鲜亮的蓝紫色荧光,而滋养细胞和包囊细胞只显示很 实验用黑腹果蝇 为本 暗的淡蓝色荧光,不能区分各细胞的轮廓。较小的生 实验室常年饲养的群体。饲养于 广口三角烧 殖包囊几乎没有荧光,只能看到包囊的轮廓,看不到其 瓶中,,光照周期为 光照: 黑暗。用琼脂 中的细胞 图 ,。 玉米粉培养基培养,培养基上撒适量酵母粉,隔 ~ 天 . 单独进行多聚甲醛固定对果蝇卵巢管荧光特性的 换一次培养基。取发育成熟的雌果蝇的卵巢作为实验 影响 材料。所用主要药品、试剂,除特别