铜绿假单胞菌生物被膜诱导肺泡上皮细胞分泌炎性细胞因子的研究.pdfVIP

688 浙汪中西医结合杂志2011年第21卷第 1o期 ZhejiangJITCWM(Vo1．21No．102011 · 实验研究 · 铜绿假单胞菌生物被膜诱导肺泡上皮细胞分泌 炎性细胞因子的研究 王 非 王 媛 赵 玮 骆仙芳 浙江中医药大学附属第一医院 杭州 310006 摘 要 目的：通过研究经铜绿假单胞菌生物被膜作用后，肺泡上皮细胞分泌炎}生细胞因子水平的变化，探讨 铜绿假单胞菌生物被膜在感染性肺纤维化中的作用。方法：采用体外诱导铜绿假单胞茵形成生物被膜，应用乙 醇沉淀法提取细菌被膜并纯化；选用人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549，采用ELISA法定量检测在铜绿假单胞生物 被膜藻酸盐作用后上皮细胞上清液中炎症因子IL一1B、IL一6、IL一8和TNF—d的水平。结果：铜绿假单胞菌生物被 膜藻酸盐作用后，A549~胞分泌IL一1F和TNF一能力在48h内持续升高，但IL一6和IL一8则在24h达到高峰，此后 下降。结论：铜绿假单胞菌生物被膜能诱导A549细胞分泌IL一113、IL．6、IL-8和TNF—a能力增强或一过性增强， 可能与其诱导肺泡炎症，进而促进成纤维细胞活化、增殖及转化有关。 关键词 铜绿假单胞茵 肺上皮细胞 炎}生细胞因子 BacterialBiofilm GrownwithPseudomonasaeruginosaStimulatingSecretionofInflammatoryCytokinesfrom Alveolar EpithelialCells WANGFei，WANGYuan，ZHAOWei，etaLTheFirstHospitalAffiliatedtoZhejiangChineseMedicalUniversity, Hangzhou(310006)，China Abstract Objective：Toobservethechangesofsecretionofinflammatorycytokinesfromalveolarepithelialcellsafterinfected byPseudomonasaeruginosa，andtoexplorehteeffectofbacterialbiofilm oninfectiouspulmonaryfibrosis．M ethods：Pseudomonas aeruginosabiofilm wasformedinvitroandthenwaspurifiedwithalcoholprecipitationmehtod．HumancelllineA549wasused tobeinfectedbyhtebiofilm．ThelevelsofIL-113，IL一6，IL一8，andTNF—XIinhtesupernatantwasdetectedbyELISA．Results：After infection，htelevelsofIL一1DandTNF—aconsistentlyincreasedin48h，whilethoseofIL一6andIL一8waselevatedin24handthen startedtodecreaseafterwards．Conclusion：Pseudomonasaeruginosabiofilm canenhna cehtecapacityofA549cellstosecreteIL- 1p，TNF一0，【IL-6，andIL一8consistentlyortemporarily．Itmayinducetheinflammatoryresponseinpulmonaryfibrosis． Keywords Pseudomonasaeruginosa alveolraepithelialcells inflammmory c~oknies 铜绿假单胞菌 (pseudomonasaeruginosa)是引起 1 材料与方法 多脏器医院感染的常见病原菌之一，能形成生物被 1．1 菌株来源及培养 铜绿假单胞菌ATCC27853株 膜，易在慢性支气管炎、支气管扩张等原有肺部慢性 购 自北京中国药品生物制品检定所。将细菌接种于 病变基础上引起肺部反复感染并纤维化[1]。有证据显 LB琼脂平板上 (Sigma)，挑取单个菌落接种至 5mL 示，铜绿假单胞菌生物被膜可能是引起该菌感染引 LB培养液中，37~C、210r／min旋转培养12～16h。取 起肺纤维的化主要因素 。然而，铜绿假单胞菌生物 lmL菌