中国荷斯坦牛FASN基因单核苷酸多态性对脂肪酸含量的影响.pdfVIP

中圈 斗2·011·18·科技 ·1 · 中国荷斯坦牛FASN基因单核苷酸多态性对脂肪酸含量的影响 侯玉沽，常玲玲，冒海赞，许路，杨章平，毛永江 (扬州大学动物科学与技术学院，扬州I 225009) 中图分类号 ：$823．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—4264(2011)18—0001—03 摘要 ：奶牛脂肪酸合成酶 (FASN)在乳脂肪酸合成 中起至关重要的作用。本研 究利用PCR—SSCP方法检测了 3l8头中国荷斯坦牛 FASN基因第 2、4、26、34外显子的单核苷酸多态性 (SNP)．并对FASN基 因SNP对脂肪 酸含量的影响进行分析。结果表 明仅第34外显子 (g．16009)存在 A／G多态性 ，基 因频率分别为 0．4481和 0．5519，其基因型分布符合Hardy—Weinberg平衡。方差分析表 明，FASN基因SNP对短链脂肪酸相对含量有 显著影响(P0．05)，AA和 AB基 因型短链脂肪酸相对含量显著高于BB型。该结果为奶牛脂肪酸合成的调控 和选种、选育提供 了理论基础 关键词：FASN基因；单核苷酸多态性 ；脂肪酸 ；中国荷斯坦牛 脂肪酸合成酶 (fattyacidsynthase。FASN)是一 供理论依据。 种基本的代谢酶类 。负责催化乙酰 CoA和丙二酸单 1 材料与方法 酰 CoA合成一种长链软脂酸 (16：0)的所有步骤 ， 1．1 样品采集 FASN基 因的表达直接影响脂肪酸合成酶多寡 ，对 在扬州大学试验农牧场选取健康 中国荷斯坦 控制动物体脂沉积具有重要意义 。脂肪酸合成酶在 牛 3l8头 ，尾静脉采血 10mL，ACD抗凝后 带 回实 哺乳动物肝脏和脂肪组织中表达_112]。Roy等研究表 验室 ，一20℃保存 。参照 《分子克隆实验指南》并 明，牛 FASN基 因有多个 SNPs，其 中Exoni(g．763) 略作修改嘲，从冻存全血 中提取 DNA。另外 。从 中选 G／C和 Exon34 (g．16009)A／G突变改变了一个潜在 择体况相近 ，无临床型乳房炎 ，胎次在 2～3胎 ，泌乳 的SP1转录因子的结合位点．导致 了苏氨酸转变为 期在 100～300d的奶牛共 119头 。采集待测奶牛的 丙氨酸。基因单倍型研究发现这些 SNPs之间存在 全天混合奶样 50mL(早：中：晚=4：3：3)，冷冻用于脂 连锁不平衡 (PO．001)嘲。Morris等发现FASN基因 肪酸测定 。 有5个 SNPs，分别是 ATindex(17250和 17251)、T／C 1．2 FASN基 因多态性分析 (16907)、C／A(15531)、G／A(15603)和A／G(17924)E4~。哺乳 1．2．1 引物设计 动物 FASN基因在胚胎发育和癌细胞生长过程中也 根据 GenBank上公布 的牛 的FASN基 因DNA 发挥一定 的作用5_『。 目前 ，国内关于禽类动物 FASN 序列 (GenBank登录号 AF285607)，用 Primer5．0软 基因已进行了较为深入的研究，但就反刍动物而言， 件设计 4对引物 (表 1)。引物 由上海生物工程技术 研究报道相对较少 。因此 ，本文研究了中国荷斯坦 有限公司合成，超纯水溶解引物，一20℃保存备用 。 牛FASN基 因SNP多态性对脂肪酸含量 的影响 ，以 1．2．2 PCR—SSCP分型 期为脂肪酸的调控 ，以及荷斯坦牛的选种、选育提 PCR反应体系组分 (20txL)：lOxBuffer2．01xL， 25mmol／LM 1．51xL，dNTP(10mmol／L)0．5L，Taq 收稿 日期 ：2011—04—28 基金项 目：江苏省大学生实践创新训练计划 ，江苏省高校 自然科学 DNA聚合酶(SU／~L)0．31zL，上下游引物(10pmol／~L)各