2050例液基细胞学检测技术在宫颈癌筛查的临床研究.pdfVIP

医学影像与检验 2011ff-8,q 第24卷 臻 鎏 鸶． ． 筻i8翘…………………………………．……垦．堂焦．垒…i PCR实验室污染原因分析及防止对策 王均华 【摘要】目的：探讨PCR实验室防止和处理污染的办法。方法：划区操作实验，严格按照实验室相关SOP工作。姑果：有效防止实验室污染。 【关键词】PcR；实验室污染；扩增产物 【中图分类号】R4-46．1 【文献标识码】B 【文章编号】1006—1959(2011)08—0309-01 PCR是英文polymerasechainreaction的缩写，中文名是 “聚合酶链反 3 防止污染的方法 应”。PCR 自1983年由Mullis博士发明至今，它一直对生命科学的研究 3．1 进行PCR操作时，工作人员应该严格遵守SOP操作规程。 作出着巨大的贡献。而由于PCR其特有的快速性、灵敏性、准确性，使得 3．2 试剂准备区、标本制备区、PCR扩增区及分析区设计要合理，要 现在越来越多的各级卫生部 门都拥有 了PCR实验室。但是正是 由于 有一定的方向性。工作人员要谨循 由试剂准备一标准制备一PCR扩增区 PCR的优点，也决定了做PCR最大的短板就是实验室污染!因为PCR检 及分析区的工作流程。 测极其灵敏，只要有极微量的一点污染就可能导致数据不准确进而实验 3．3 任何一间的产物及器材不要拿到其他两个工作区。特别要提 失败更有甚者会导致实验室的关闭与搬迁 ，后果极其严重。因此，PCR实 醒的是各区要有独立的打扫工具，切记不可窜用。如有专门的打扫人员。 验室如何 防止其污染是运行整个 PCR实验室的重中之重。 因对其进行相关知识的培训。 l PCR实验室污染的主要几个原因 3．4 使用一次性吸头，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶 1．1 标本问的交叉污染：一个样本在采集的时候都有可能会污染到 的污染。 标本的收集容器。当多个标本放在一起的时候，由于操作原因，会使各标 3．5 操作多份样品时，制备反应混合液。先将 dNTP、缓冲液、引物和 本直接产生交叉污染。或者在吸样的时候，由于加样器污染而导致标本 酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的 间的污染。或者在加样的时候，由于不当操作使加样器频繁得经过已经 精确度 。PCR试剂，PCR反应液应与样品及PCR产物分开保存 。不应放 加过样 的孔，导致样本 间的交叉污染。 于同一冰盒或同一冰箱。 1．2 PCR扩增产物污染：这是 PCR反应中最主要最常见的污染问 3．6 最后加入反应模板 ，加入后盖紧反应管。 题。因为PCR经过多个循环以后 ，产物拷贝量极大 。远远高于 PCR检测 3．7 操作是要轻拿轻放，开盖要轻，尽量避免气溶胶的产生 。 的极限，所 以极微量的PCR产物污染 ，就有可能造成假 阳性 的结果。特 3．8 每次实验完后，扩增产物都要及时密封后处理。 别是气溶胶的污染，在操作时，如开盖、吸样都可形成气溶胶而产生污染。 3．9 每次做完实验，要养成对生物安全柜和超净工作 台进行消毒的 据计算一个气溶胶颗粒就可含有48000拷贝，而PCR实验的灵敏度又极 好习惯。 高，因此气溶胶污染极易破话整个 PCR实验 ，而且很不容易找到污染 的 4 讨论 原因所在。 每个操作PCR实验的工作人员，必须要具有相应理论知识及操作培 1．3 实验室物品的交叉污染：在实际工作中，工作人员往往会把扩 训合格证书，这也是确保实验室避免污染的重要基础。平时要注重实验 展区或产物分析区用的笔、纸、手套等物品不经意带入到其他洁净的区域