庆大霉素产生菌原生质体融合高产株与发酵罐试产研究.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（８）：６２～６７ 庆大霉素产生菌原生质体融合高产株 与发酵罐试产的研究  管玉霞 　蓝基贤　严广兴　郑景世 （福州大学生物科学与工程学院　福州　３５０００２） 摘要　对庆大霉素产生菌绛红色小单孢菌（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｐｕｒｐｕｒｅａ）原生质体分别用硫酸二乙酯 （ＤＥＳ）和紫外线（ｕｖ）进行诱变、融合，用庆大霉素进行抗性筛选、再生后得到高产菌株；经摇瓶连 续１０批次发酵考查，平均发酵单位在２２００±Ｕ／ｍｌ；又经５Ｌ发酵罐连续发酵考查７批次，产量平 均１９００±Ｕ／ｍｌ。产品质量符合药典。 关键词　绛红色小单孢菌　原生质体诱变融合　抗性筛选　发酵罐产量 中图分类号　Ｑ８１３．２ 　　庆大霉素（ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ，ＧＭ）是氨基糖苷类广谱抗生 于高投入，低产出，使得西方各国生产庆大霉素受到限 ＋ ? 制，导致一些国家纷纷瞄准国际市场，采取大量购进无 素，对 Ｇ 、Ｇ菌特别是对绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌 有良好的抗菌效能，临床肌肉（静脉）注射后吸收迅速、 菌庆大霉素粉剂原料药的方法，以满足临床需求。于 完全，故被广泛应用于消炎退烧；同时，口服给药在体 是中国就成为世界庆大霉素原料药的生产基地，所以 内难以吸收，在肠道中保持较高浓度，确保其杀菌效 降低生产成本和增加产量以满足国内国际市场的需 果，又被临床用于胃肠道和呼吸道感染。后又发现能 求，是摆在我们面前的艰巨任务。 促进饲料的利用率，在禽畜体内不留残毒或低残毒［１］ 　　目前提高庆大霉素发酵单位的主要措施是改变菌 于是又被广泛用于畜牧业，生产“绿色食品”。 株的遗传性状，通常采用物理化学诱变剂处理小单孢 　　其作用机理是与细菌核糖体的３０Ｓ亚基结合，从 菌，包括太空育种［４］；后来又采用原生质体融合［５、６］、 ［７］ ［８］ 而抑制细菌合成蛋白质或引起信使核糖核酸（ｍＲＮＡ） 质粒改造 等，但均未能有所突破。近年来，刘峰等 １２ ［２］ 采用 Ｃ离子束辐射选育庆大霉素高产菌株获得生产 上的密码错误而合成无功能蛋白质致细菌死亡 近年 来的研究又表明，它直接与３０Ｓ核糖体亚单位的１６Ｓ 发酵单位达１３００Ｕ／ｍｌ以上。 ｒＲＮＡ编码区的Ａ部位结合，其对原核生物和真核生物 　　我们则采用几种方法相结合即制作庆大霉素产生 ［３］ 菌的原生质体，用物理化学方法诱变原生质体后，进行 的核糖体作用大不相同 。 　　庆大霉素自１９６３年问世至今已几十年，国内外生 原生质体融合，抗耐药性筛选，得到发酵摇瓶２２００± Ｕ／ｍｌ的菌株；后又在５Ｌ玻璃发酵罐进行稳定实验，连 产水平虽逐步提高但进展缓慢。生产中虽经多方面技 续运转７批次，得到平均１９００±Ｕ／ｍｌ的显著结果。 术改进，包括菌种选育及发酵条件优化，但生产单位仍 无突破，几株小单孢菌生物合成抗生素的水平（如庆大 １　材料与方法 霉素，西索米星等）远远低于由链霉菌所产抗生素水平 １．１　发酵培养条件 （如链霉素和四环素等）。庆大霉素发酵单位国内一般