猕猴桃ACC氧化酶反义基因转化猕猴桃的研究.pdfVIP

第32卷 第 11期 中 南 林 业 科 技 大 学 学 报 Vb1．32 No．11 2012年 11月 JournalofCentralSouthUniversityofForestry Technology Nov． 2012 猕猴桃ACC氧化酶反义基因转化猕猴桃的研究 田宏现 ，苑 平 ，王曼玲 3刘 艺 ，李 菁 ，夏新界 ，谭晓风 (1．中南林业科技大学，湖南 长沙 410004；2．吉首大学，湖南 吉首 416000；3．中国科学院 亚热带农业生态 研究所 ，湖南长沙 410125) 摘要：为建立猕猴桃ACC氧化酶反义基因功能研究技术平台并通过生物技术改良猕猴桃，从海沃德猕猴桃 (ActinidiachinensisPlanch．var．deliciosaH‘ayward’)叶片中提取总RNA，反转录合成eDNA第一链，并以此为模板， 扩增得到ACC氧化酶 (ACO)基因片段约 1kb，经限制性内切酶图谱分析，组建亚克隆并进行测序，其开放阅 读框长 957bp，编码319个氨基酸，与其他已公布的ACC氧化酶cDNA的核苷酸 (AB003514．1)及氨基酸序列 (BAA21541．1)同源率分别高达 94．0％和 95．6％，证明所克隆的eDNA序列的准确性。构建该基因的反义表 达载体，并通过农杆菌介导的方法成功转化米 良一号猕猴桃 (Actinidiadeliciosacv．Miliang．1)，得到再生苗。 取 14株经PCR检测，其中 10株检测到ACC氧化酶基因目的条带，阳性植株 占71．4％。实时荧光定量PCR分 析结果显示，再生苗ACO基因的表达量低于野生型58％～81％。 关键词：猕猴桃；ACC氧化酶；农杆菌介导；反义表达载体 中图分类号：$759．3 文献标志码：A 文章编号：1673—923X(2012)11-0115．07 GenetictransformationofkiwifruitwithitsACC oxidaseantisensegene TIAN Hong—xian’。，YUAN Ping，WANG M an．1ing，LIUYi，LIJing2 ， XIAXin-jie，TANXiao—feng (1．CenrtalSouthUniversityofForestryAndTechnology,Changsha410004，Hunan，China；2．JishouUniversiyt,Jishou416000，Hunan， China；3．InstituteofSubtropicalAgriculture，ChineseAcademyofSciences，Changsha410125，Hunan，China) Abstract：Inordertoestablishthetechnologyplatof1111forthekiwifruit’swithItsACC oxidaseantisensegenefunctionsandimprove kiwifruitqualiyt htroughbio-technology,thekiwifruitleaves(fromActinidiachinensisPlanch．var．deliciosa Hayward’)wereused tocloneacDNAofACO gene，anditssequencewasanalysed．．Thesequencewas1003bpinlength，wiht allopenreadingrfameof957 bp．encording319aminoacidresidues．TheDNAsequenceanditsdeducedma inoacidsequenceshowed94．0％ and95．6％ homology andsimilariytw