转基因大豆GTS40—3—2品系特异性环介导等温扩增法检测方法的建立与应用.pdfVIP

2012．No_12 搏铷 饲料工 CEREA~鞋F鞑蛏 { ”嚣 }lY 转基因大豆 GTS40—3—2品系特异性环介导 等温扩增法检测方法的建立与应用 刘 津 ，凌 莉 ，吴少云 ，蔡 颖。，石 磊 ，高东微 ，李志勇 (1．广东检验检疫技术中心，广东 广州 510623；2．华南理工大学生物科学与工程学院，广东 广州 510006；3．汕头出入境 检验检疫局 ，广东 汕头 5150313；4．华南理工大学轻工与食品学院，广东 广州 510640) 摘 要：根据外源插入序列与大豆 内源基因边界序列，用设计软件 PrimerExplorerVersion3设计并筛选了转基 因大豆 GTS4O一3—2品系的环介导等温扩增引物，并进行 了反应体 系和反应条件的优化，建立了转基因大豆 GTS40—3—2品系特异性环介导等温扩增检测方法。对该方法进行 了特异性、灵敏度、稳定性评价，结果显示：该 方法能够特异、稳定、灵敏地检测大豆及其制品中的转基 因大豆 GTS40—3～2成分，检测低限达到 0．5 。此外 ， 对 12份实际样品的检测结果表 明，该方法与实时荧光PCR方法的检测性能相 -3，结果吻合率为 100 ，假阳性率 和假 阴性率均为0。 关键词：环介导等温扩增；转基因大豆品系GTS40—3～2；特异性检测 中图分类号 ：TS207．3 文献标志码：A 文章编号：1003—6202(2012)12—0060--04 Establishmentandapplication ofspecific loop-mediated isothermalamplification method for detection oftransgenic soybeanGTS40——3——2 strains LiuJin ，LingLi，WuShaoyun。，CaiYing。，ShiLei，GaoDongwei，LiZhiyong (1．GuangdongInspection8LQuarantineTechnologyCenter，Guangzhou510623，China；2．SchoolofBioscienceandBioengineer— ing，SouthChinaUniversityofTechnology，Guangzhou510006，China；3．ShantouEntry-ExitInspectionandQuarantineBu— reau，Shantou515031，China；4．CollegeofLightIndustryandFoodScience，SouthChinaUniversityofTechnology，Guangzhou 510640，China) ABSTRACT：AccordingtOtheexogenousinsertsequencesconnectedwiththebordersequencesofsoybeanendogenousgenes，we designedandscreenedspecificloop—mediatedisothermalamplificationprimers，andoptimizedthereactionsystem andthereac— tionconditionsusingadesignsoftwarenamedPrimerExplorerVersion3，thenestablishedthespecificloop-mediatedisothermal amplificationmethodforthedetectionofthetransgenicsoybeanlineGTS40—3—2strains．Thespecificity，stabilityandsensi— tivityofthismethodwereevaluated．TheresultsindicatedthatthetransgenicsoybeanGTS 40—3—2couldbedistinguished from varioussoybeanstrainsandtheirderivedproductsspecifically，stablyandsensitivelywithLOD of0．5 ．Inaddition，the detectionr