三种培养液进行海马神经元原代培养对比研究.pdfVIP

UniversitatisMedicinalisAnhui2006 ·521· 安徽医科大学学报Acta Oct；41(5) 三种培养液进行海马神经元原代培养的对比研究 徐东芳1，朱长太1，刘东梅2，姬艳丽1，刘治娟1，方亚平1，姚余有1 摘要 目的使用3种培养液对海马神经元进行培养，遴选 心提供。以早：6=1：1于7：00pm配对合笼，次 出一种使神经元存活率较高、存活时间较长的培养液。方法 日8：00am检查，查到黄白色米粒样阴栓存在，并进 分离SD大鼠胎鼠的海马神经元，分别用DMEM、DMEM／ 行阴道涂片查看有精子，记为孕0．5d。 F12和Neurobasal培养液进行培养，应用倒置相差显微镜、台 Nutrient 1．2主要试剂DMEM(高糖)粉剂、F12 盼蓝排斥实验、M1Tr法和LDH释放率法进行细胞形态和细 Mixture粉剂、Neurobasalmedium、N2 supplement和 胞活力分析。结果Neurobasal培养液培养的神经元细胞活 B27 力，与另二组培养液培养的神经元活力相比差异有显著性 聚￡．赖氨酸、胰蛋白酶、四甲基偶氮唑盐(MYr)和 (P0．05)。结论Neurobasal培养液可作为海马神经元体 外培养的良好培养液。 台盼蓝均为Sigma公司产品；96孔培养板为美国 主题词培养基；海马／细胞学；神经元；细胞，培养的 446．5 中图分类号R322．81；R329．2；R 季青生物工程材料有限公司产品；乳酸脱氢酶 文献标识码A文章编号1000—1492(2006)05—0521—04 (LDH)测定试剂盒由上海复星长征医学有限公司 所生产；完全培养液的配制。 海马作为边缘系统的重要组成部分，具有高度 DMEM完全培养液12J：按照试剂盒说明书配制 序化板层结构和神经元相对独立分布等特点，成为 DMEM粉剂，另加入终浓度为2mmoL／L谷氨酰胺、 最理想的神经科学研究模型¨J。要从细胞和分子 10mmol／L 水平上深入研究海马神经元的物质代谢、生理、药理 10％马血清、10 mg／L胰岛素、50万IU／L青霉素G 及形态特征，海马神经元的原代培养是一个必不可 和50万IU／L链霉素。 少的前提条件。通过原代培养，能建立一个反映在 DMEM／F12完全培养液口o：分别按照试剂说明 体神经元活动很好的实验模型，具有影响因素单一、 书配制DMEM和F12，将二者等量混合后，另加入终 机体复杂因素干扰少和结果容易分析等优点。因此 我们收集国内外文献报道较多的3种培养液，应用 浓度为10％FCS、终浓度为1％N2