短小乳杆菌重组S-层蛋白质的纯化及其体外黏附性的初步鉴定.pdfVIP

动物医学进展，2013，34(7)：57—61 in Medicine ProgressVeterinary 短小乳杆菌重组S一层蛋白质的纯化 及其体外黏附性的初步鉴定 王彩凤，敖敦格日勒，小 琴，特尼格尔，赵 慧，格日勒图’ (内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古呼和浩特010018) 摘 并用LiCl的方法进行纯化。应用SDS和Westernblot方法对表达产物进行鉴定，应用ELISA方法 鉴定重组融合蛋白的体外黏附特性。在大肠埃希茵裂解样品中，SDS和Westernblot结果均证明分 子质量大小约为71 效地黏附在乳酸乳球茵NZ9000表面。本试验为s-层蛋白质生物学特性的进一步研究奠定了基础。 关键词：短小乳杆菌；重组S-层蛋白质；纯化；体外；黏附特性 中图分类号：Q789；Q51 文献标识码：A 孓层蛋白质(S-layerprotein，SLP)是指由一层分子筛，胞壁质水解酶等发挥作用[9]。而乳酸菌的 晶格状排列的单分子蛋白或糖蛋白亚单位组成的胞 SLP在异源蛋白质的分泌性表达甚至表面展示等方 浆外层结构[1]。它是位于某些革兰阳性细菌和革兰 面有着更广阔的应用前景。 阴性细菌以及古细菌的细胞表面独特结构，其厚度 本研究应用基因工程技术克隆短小乳杆菌 nm～15 ku～ 通常约为5 am，分子质量约为40 (Lactobacillus 200 ku，而乳酸杆菌的孓层蛋白质分子质量相对较 得其大肠埃希菌表达产物并进行鉴定，最后对纯化 小，约为25ku～71 ku／引。与其他细菌的SLP相 的重组SLP的黏附特性进行初步鉴定和分析。 比，乳酸菌SLP的显著特点是分子量小、等电点高。 1材料与方法 几乎所有SLP均可自组装成二维的倾斜的、正方形 1．1 材料 的、六边形的对称晶格结构，覆盖在整个菌体表面， E．coli BL21 1．1．1 菌株和质粒 DH5a、E．coli 以非共价键相互作用。 (内蒙古农业大学动物科学与医学学院实验研究中 研究表明，无论是在溶液中还是多种固相载体 心分离并保存)；乳酸乳球菌NZ9000(购自荷兰)；载 上，SLP可以在熵的驱动下自组装成晶格结构[3]。 这一特点使其在纳米技术、纳米生物技术领域备受 研究者青睐。如借助基因工程技术，将SLP的基因 (内蒙古农业大学动物科学与医学学院实验研究中 克隆至合适的表达载体中，获得的重组SLP的结构心构建)。 和性质并未发生变化[4]。甚至经过遗传改造，原本 1．1．2主要试剂普通质粒小提取试剂盒(TIAN— 不具有黏附能力的乳酸菌，通过表达了SLP以后可 I、BamH DNA聚合酶、T4DNA连接酶、 获得黏附能力[5]。在医学领域，乳酸杆菌SLP因其 I、Taq 高度规则的结构，显著的黏附能力和自组装能力，可 望发展为潜在的免疫治疗和预防的候选材料，如药 畜产大学原虫病研究中心制备)，山羊抗鼠IgG- 物靶标、疫苗和活性抗原递呈载体[6]。此外，SLP可 作为毒力因子在确定和维持细胞的形状上起作 标板(康公司宁)；其他化学试剂均为国产分析纯。 Premier 用[7]，也可作为细胞黏附的介质物，也可作为未成熟 1．1．3 引物设计应用Primer v5．0生物 树突状细