参麦注射液对淋巴管内皮细胞增殖及凋亡的影响.pdfVIP

48 安徽中医学院学报 第 3O卷 第 3期 2011年6月 JOURNAlOFANHUITCMCA)IIEGE Vo1．30 No．3Jun．2011 参麦注射液对淋巴管内皮细胞增殖及凋亡的影响 李明秋 ，杨春壮，王 莹，冯克俭 (牡丹江医学院解剖教研室 黑龙江省高校肿瘤疾病防治重点实验室，黑龙江 牡丹江 157011) [摘要]目的 探讨参麦注射液对淋 巴管 内皮细胞(1ymphaticendothelialceils，LECs)增殖和凋亡的影响。 方法 取健康猪的胸导管内皮细胞进行分离、培养；采用Ⅷ 因子、血管 内皮生长因子受体 3(vascularendo— thelialgrowth{actorreceptor一3，VEGFR一3)抗体联合对 LECs进行鉴定；采用 甲基噻唑基四唑 (methylthia zolyltetrazolium，MTT)染色法检测参麦注射液对 LECs的生长抑制作用；采用 Hoechst33258荧光染色法 检测 LECs凋亡。结果 形成了典型的LECs；当浓度为 40～160Fg／ml时，参麦注射液能明显抑制 LECs 的增殖，且抑制作用呈现剂量依赖关系；Hoechst33258荧光染色检测证实，经参麦注射液处理后 LECs，可 观察到其核周 围有凋亡小体 。结论 参麦注射液能抑制淋 巴管生成和诱导LECs凋亡。 [关键词]参麦注射液 ；淋巴管生成；淋巴管内皮细胞 ；细胞凋亡 [中图分类号]R285．5 [文献标志码]A [DOI]10．3969／j．issn2011．03．019 侵袭和转移是恶性肿瘤 的基本特征，也是肿瘤 胰蛋 白酶 ：吉泰科技有 限公司，进 口分装；Hoechst 致死的主要原 因。肿瘤淋巴转移是大多数肿瘤发生 33258荧光染料 ：购于碧云天生物技术研究所；甲基 转移的早期事件 ，对临床治疗及预后起至关重要的 噻唑基 四唑 (methylthiazolyltetrazolium，MTT)： 作用 。目前 ，由于血管内皮生长 因子受体 3(vascu— 购于华美生物工程公司，进 口分装 ；参麦注射液 (由 larendothelialgrowth {actorreceptor一3，VEGFR一 人参和麦冬组成 ，每 10ml含生药 2g)：正大青春宝 3)、淋巴管透明质酸受体 1(1ymphaticvesselendo— 公司 ；LECs取 自健康猪胸导管。 thelialhyaluronan receptor～1，IYVE一1)、podopla 1．2 仪器与设备 SIEMENS电冰箱 (KKzZE18T)； nin和 desmoplakin等淋 巴管 内皮细胞 (1ymphatic 电子分析天平 (BS214D)；雷磁精密 PH计 (PHS一 endothelialcells，LECs)标记物口 的发现 ，肿瘤新 3C)；自动手提式灭菌器 ；自动三重纯水蒸馏器 (SZ一 生淋巴管的基础研究取得了较大的进展 ，抗肿瘤新 97)；二氧化碳细胞培养箱 (HH ·CP)；Boxun超净工 生淋巴管治疗有希望成为肿瘤生物治疗 的一种新模 作台(垂直单 向流型)；Anke低速 台式离心机 (KA一 式。肿瘤转移的研究一直是肿瘤研究中的热点和治 1000)；OLYMPUS倒置荧光显微镜 (CK×41)。 疗难点。血管 内皮生长 因素 (vascularendothelial 2 方法 growthfactor，VEGF)家族及其受体 、淋巴管生成 、 2．1 LECs培养 按参考文献E3]方法，在无菌条件 肿瘤转移三者关系 的研究为解决这一 问题提供 了新 下分别在胸导管近、远端各显露一小段胸导管，在显 的思路。但是，肿瘤淋 巴道转移是否依赖于淋 巴管 露的胸导管上各剪一小口，并在胸导管的近远端分别 生成还存在着争议 。本研究通过观察不同浓度 的参 静脉留置针结扎 固定 。用 DHanks液反复冲洗胸导 麦注射液对 LECs增殖和凋亡 的影响，初步探讨参 管后 ，通过远端静脉留置针向胸导管内注射胶原酶(1 麦注射液对 IECs的作用 ，为临床找到有效而不 良