穿膜肽与蛋白微球偶联物的制备及鉴定.pdfVIP

· 406· 黑龙江医药 HeilongjiangMedicineJournalVoL24No．32011 穿膜肽与蛋白微球偶联物的制备及鉴定 刘金华 ，周 洁 ，冷 静 1．广西医科大学基础 医学院免疫学教研室；2．广西医科大学第一附属医院泌尿外科； 3．广西中医学院(广西 南宁 530021) 摘 要 目的：制备穿膜肽TAT—EGFP与白蛋白微球 (BSA—NP)偶联物，并检测其对膀胱癌 细胞的穿膜活 性。方法：通过异型双功能交联荆N一羟基琥珀酰亚胺基一3一(2一吡基二硫 )一丙酸酯 (SPDP)交联的方法制备 穿膜肽TAT—EGFP与白蛋白微球偶联物。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS—PAGE)、电镜、荧光显微镜及共聚焦显 微镜检测其共价连接及活性。结果：SDS—PAGE电泳鉴定TAT—EGFP与 白蛋 白微球是通过共价键连接 ；电镜显示 二联偶联物( 一EGFP—BSA—NP)的构象；荧光显微镜及电镜显示了二联偶联物的穿膜活性。结论：成功的制备 穿膜肽TAT—EGFP与白蛋白微球偶联物一TAT—EGFP—BSA—NP，且偶联物对膀胱癌细胞有穿膜活性。 关键词：穿膜肽；血清白蛋白微球；蛋白偶联 ；N一羟基琥珀酰亚胺基一3一(2一吡基二硫 )一丙酸酯 中图分类号：TQ46 文献标识码 ：A 文章编号：1006—2882(2011)03—4O6—04 StudyonPreparationandDeterminationofNanospheresCoupled withCell——penetratingPeptides LiuJinhua ，etal 1．DepartmentofImmunologyofCollegeoftbeclinicalScienceofGuangxiMedicalUniversity (Nanning530021，Ghina)； Abstract：Objective：Topreparenanospherescoupledwithcell—penetratingpeptides(Cpps)andevaluateitsabilityto crosstheplasmamcnlbran~ofbladdercancereell(Fjcel1)．Methods：ThenanospherecoupledwithTAT—EGFPwaspre— paredbymethodsofcrosslinkingviahetero——bffunctionalcross——linkerSPDP．NanosphOresanditspene~atingactivitywere testedbySDS—PAGEelectrophoresis，scanningelectronmicroscopyandlaserscnaningconfocalmicroscope (ISCM) ． Results：SDS—PAGEclectmphoresisrevealedthenanosphereslinkedcovalcnflywithTAT—EGFP．Thepenetratingactivity 0i1A 一EGFP ispreservedunderscanningelectronmicroscopyandLSCM．Condusion：Theprepraationof飞 一EGFP— BSA—NPwassucceeded．Itwasbindedbycovalentbondanditcouldpenetrate日 cel1． Keywords：Cpps；nnaosphcre；protein—proteinconjugation；SPDP 自1988年Green等 首先发现并证实人免疫缺陷病 究国内尚未见有报道。本实验利用分子量小、稳定表达 ，并 毒(HIV一1)的反式激活蛋 白TAT具有跨膜转移的功能后， 在 自身发光过程中对各种细胞均无明显毒害作用