喘可治抑制灭活HIV-1颗粒诱导人CD4＋T细胞凋亡机制研究.pdfVIP

· 482 。 世界中西医结合杂志2011年第6卷第6期 w。rldJournal。flnt atedTraditi。na1andWesterl【Medicine 2011Vo1．6，N。6 ， · 实验 研 究 · 喘可治抑制灭活 HIV一1颗粒诱导人 CD4+ T细胞凋亡机制研究 黄秀艳 曾耀英 许铮弟 【摘要】 目的 通过深入研究HIVp对CD4T细胞凋亡的影响，以探讨 HIV病中CD4T细胞 丢失的可能机制以及喘可治(CKZ)对 CD4 T细胞凋亡的调控作用。方法 AT一2灭活HIV一1llIB 型病毒颗粒，ELISA法检测p24抗原的含量 ；然后将HIVp加入到PBMCs中，使p24抗原终浓度为1ng ·mL～；在相应的组中加入喘可治，使其终浓度为40 L ·mL (v／v)。48h后，运用荧光标记的An— nexinV染色技术结合流式细胞术评价CD4T细胞的凋亡率；运用免疫荧光抗体染色技术结合流式 细胞术检测CD4T细胞CD95和DR5的表达；运用胞内免疫荧光抗体染色技术和分子探针染色技术 结合流式细胞术检测CD4T细胞Apo2．7和线粒体内膜膜电势(A,m)的水平。结果 与对照组相 比，HIVp可以引起明显的CD4 T细胞凋亡 (P0．01)，而喘可治能够有效抑制HIVp弓I发的CIN T 细胞凋亡 (P0．01)。结论 HIVp通过外源性凋亡途径和内源性凋亡途径删除CD4T细胞 ，从而 导致免疫缺陷；喘可治能够保护CD4T细胞而有望开发成为艾滋病治疗的辅助药物。 【关键词】 喘可治；HIV一1颗粒；凋亡 M echanism on theInhibitionandInactivationofHIV ．．1Granulesandthe InductionofHumanCD4 T ApoptosisbyChuankezhi HUANG Xiu—yan ，ZENG Yao—ying ，XU Zheng—di (1．TissueGraftandImmuneExperimentCenter，JinanUniversity，GuangzhouGuangdong510632；2．Guang— zhouWanzhengPharmaceuticalLimitedCompany，GuangzhouGuangdong510663) A【bstract】 Objective ToexplorethepotentialmechanismonCD4TcelllossinHIVandthereg— ulationofCD4 Tapoptosisbychuankezhi(CKZ)throughthedeepresearchoftheimpactsofHIVponCD4 Tapoptosis．Methods AT一2wasappliedfortheinactivationofHIV一1llIBviralgranules．ELISA was usedtodetectthecontentofp24antigen．HIVpwasaddedintoPBMCssoastoenabletheternfinalconcen— trationofp24antigenas1ng。mL ～1．CKZ wassupplemented incorrespondinggroupssoastoenableits terminalconcentrationas40 L ·mL (v／v)．48h1ater，thefluorescencelabelingAnnexinVstainingteeh— niquecombinedwithflowcytometry(FCM)wasadoptedtoevaluatetheapoptosisrateofCD4 Tcel1．Theim— munefluorescentantibodystainingtechniquecombinedwithFCM wasusedtodetecttheexpressionsofCD95 andDR5in CD4 T cel1．Theintracellularimmunefluorescentantibodystainingtechniqueand molecu1ar pro