南瓜CmNAC基因片段的克隆与序列分析.pdfVIP

中国虐亏通提 2011，27(16)：151—155 ChineseAgriculturalScienceBulletin 南瓜CmNAC基因片段的克隆与序列分析 郝 芮，赵福宽，孙清鹏，杨爱珍 (北京农学院生物技术学院，北京 102206) 摘 要：NAC转录因子是特异存在于植物中具有多种生物功能的新型转录因子，其家族成员N端含有保 守氨基酸序列 ，C端为高度变异的转录激活区。本研究以南瓜叶片为材料 ，根据甘蓝型油菜NAC1、番 茄NA 辣椒NAC保守结构域设计 1对简并引物 ，采用RT-PCR方法扩增得 出长度约为440bp大小的 DNA片段 ，将其克隆至pMD19一T载体上，而后对重组克隆进行测序 ，用BLAST和DNAMAN软件对核 酸及氨基酸序列进行分析，结果表明所获得的南瓜NAC基因片段 由442个碱基组成，编码 147个氨基 酸 ．命名为CmNACo该基 因片段具有其他植物NAC基 因中存在的保守区，并且属于NAC家族 中 ATAFI／2亚家族。 关键词 ：南瓜 ；NAC；基 因克隆；序列分析 中图分类号 ：$642．1 文献标志码 ：A 论文编号：2011-0874 CloningandSequenceAnalysisofCmNACGeneFragmentsinCucurbitamoschata HaoRui，ZhaoFukuan，SunQingpeng，YangAizhen (CollegeofBiotechnology,BeijingUniversityofAgricuhure，Beijing102206) Abstract：NAC transcriptionfactorsthatareuniquetoplantsarethenew typetranscriptionregulatoryfactors with multiple biologicalfunctions．Their family proteins contain a conserved amino acid sequence in N—terminalendsandhighlydifferenttranscriptionreug latorydomaininC temr inalends．Inthisexperiment，a pairofdegenerateprimerswasdesignedbasedontheconservedsequencesofNACgenefrom Brassieanapus， tomato and Chili．NAC transcription factorgene fragmentabout440 bpwasamplifiedbyRT—PCR from CucurbitamoschataleavesandclonedintopMD一19T vector，andthentherecombinantclonesweresequenced． ThesequencesofnucleicacidandaminoacidwereanalyzedusingBLASTandDNAMANsoftware．Theresults showedthatNAC transcriptionfactorgenegainedfrom Cucurbitamoschataincluded44 2bp，encoding 147 aminoacids，whichnamedCmNAC TheNACgenefragmentscontainedaconservedregionlikeotherplant NACgenesandbelongedtotheNACfamilyATAFI／2subfamily． Keywords：Cucurbitamoschata；NAD genecloning；sequenceanalysis 0 引言 是高等植物中所特有的一类数量较多的多功能蛋 白家 南瓜在食用、药用 、观 赏、加工等方面得