猪肺炎支原体强弱毒株AFLP分析方法建立及应用.pdfVIP

维普资讯 J．SHANX!AGRIC．UNIV．(NaturalScienceEdition) 囡ll譬豳 学报(自然科学版)2oo7，27(1 002223 猪肺炎支原体强弱毒株 AFLP分析方法建立及应用 姜俊兵 ，邵国青。，张 映 (1．山西农业大学 动物科技学院，山西 太谷 030801；2．江苏省 农科院兽医研究所，江苏 南京 210014) 摘 要：猪肺炎支原体 168株是由江苏省农科院畜牧兽医研究所对国内分离强毒株 (Js株)传代致弱而育成的一个 无细胞培养弱毒株，其形成的分子机理并不清楚，本试验 旨在揭示其遗传变异的规律。研究选择 Mhp国际标准株 J 株、国内鉴定强毒株一济南株、Js株 以及 168弱毒株的5个不同培养代 次进行扩增片段长度 多态性 (Amplified FragmentLengthPolymorphism，AFLP)分析。从 35对 AFLP引物组合 中共筛选 出6对具有 良好 多态检 出率的引 物组合 。扩增产物上变性聚丙烯酰胺 电泳。银染显色，UPGMA聚类分析 ，J株、济南株、Js株和 168弱毒株不 同 培养代次聚为三个不同的类群，而 168弱毒株不同培养代次之间又可细分为两个亚类群。即高代次的和低代次的两 个亚类群。实验从分子水平初步证明Mhp168弱毒株在遗传上已经形成了一个稳定的毒株。 关键词 ：猪肺 炎支原体 ；AFLP；遗传稳定性 中图分类号：S828 文献标识码 ：A 文章编号：1671-8151(2007)01—0062—04 OptimizationofAFLP Fingerprintingand ScreeningofPrimerPairsin GeneticStabilityAnalysisof M hps JIANG dun-bingeta1． (CollegeofAnimalScienceandTechnology。ShanxiAgriculturalUniversity．Taigushanxi030801·China) Abstract：InordertostudythegeneticstabilityoftheattenuatedstrainofMhp168，AFLPanalysiswasperformeda— mongMycoplasmahyopneumonia Jstrain，Jinanfieldstrain，JSfieldstrainandfivedifferentgenerationsof168 strain．Screeningtheprimerpairsdiscoveredthat6primerpairscanbeusedforconstructingAFLPmapofM hpswith differentpathogenicity．TheAFLPmapswereanalyzedbyUPGMA。the168strainwithdifferentculturegenerations clusteredintoabranchamongallthetestedstrainofMhps．Thefivedifferentculturegenerationsof168straincanbe dividedinto2SUb-branches。thehighculturegenerationandthelowerculturegeneration．Theseresultssupportthei— deathathighgenerationsof168strainisstableinheredity． Keywords：Mycoplasmahyopneumonia；AFLP；Geneticstability 猪肺炎支原体 (Mycoplasmahyopneumonia， 方法 ，它 的出现是 DNA指纹技术 的一大突破。 Mhp)是引起猪支原体肺炎 (MycoplasmaPneu— AFLP不仅是 RFLP与 PCR相结合 的一种技术， moniaeofSwine，MPS)的主要病原 ，对养猪业