不同脱钙方式观察牙髓组织切片的效果比较.pdfVIP

广东医学 2012年4月 第 33卷第7期 GuangdongMedicalJourn~ Apr．2012，Vo1．33，No．7 · 917 · 不 同脱钙方式观察牙髓组织切片的效果 比较 万蕾 ，章锦才 ，轩东英 ，孙书昱 。南方医科大学研究生学院(广州 510515)；广东省 口腔 医院、南方医科大学附属 口腔医院(广州 510280) 【摘要】 目的 比较 乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetra—aceticacid，EDTA)脱钙法和复合酸脱钙法处理的 牙齿石蜡切片的牙髓组织学形态特点。方法 选用 10％ EDTA及复合酸 (Plank—Rychlo)脱钙液，分别用于牙齿 石蜡切片脱钙 ，通过记录脱钙时间，观察 HE染色效果，评价室温下 (20～28oC)2种不同脱钙液对切片制作的影 响。结果 EDTA脱钙液处理的石蜡切片牙髓细胞、成牙本质细胞、牙本质小管结构清晰，色泽对 比鲜明，但脱钙 时间较长；Hank—Rychlo脱钙液脱钙速度相对较快，但染色较 EDTA脱钙液稍显模糊。结论 在制作牙齿石蜡切 片观察牙髓组织学形态时，EDTA脱钙液和Plank—Rychlo脱钙液所制切片均能取得 良好的染色效果。 【关键词 】 脱钙技术；石蜡切片；HE染色 在牙体牙髓研究领域，采用显微镜观察牙髓组织 tetra—aceticacid，EDTA)脱钙液 ：EDTA10g，0．2mol／L 特定染色切片为最常见的研究手段之一。由于牙体硬 Tris缓冲液 100mL，用NaOH缓慢调整pH至7；复合酸 组织内含有大量的无机盐成分，坚硬致密，易碎难切， (Plank—Rychlo)脱钙液：氯化铝 7g，盐酸 8．5mL，甲 而位于牙体中央的牙髓则为柔软的结缔组织 j，在制 酸 5mL，加蒸馏水至 100mL 。 片过程中易受挤压、牵拉而变形、分离甚至脱落流失， 1．4 标本制备 经患者同意 ，牙齿拔除后置于 10％ 所以牙体组织需经脱钙处理才能制成较薄的石蜡切片 中性甲醛固定液固定离体牙 ，3d后取出在流水冲洗作 并获得满意的染色效果。传统研究主要通过劈牙获取 用下，金刚砂高速涡轮机沿牙体相对的2个轴面均匀 牙髓 ，即所谓的劈牙取髓法，关为群等 报道劈牙取髓 磨除，直至透过牙体硬组织可清晰看见完整的髓腔形 虽然简便快速，但不适用于需要对牙髓不同部位进行 态，再固定3～4d确保牙髓充分固定 (固定时间共 1 比较的研究实验 。现在 ，随着脱钙技术的成熟，通过脱 周)，随机分为两组。EDTA组：取出薄块 ，流水冲洗 ， 钙制备牙齿石蜡切片对牙髓进行相关研究逐渐引起人 浸泡于 EDTA脱钙液 ，常温脱钙。复合酸组 ：取 出薄 们的关注。为更好地了解脱钙技术对牙齿石蜡切片制 块 ，流水冲洗，浸泡于 Plank—Rychlo脱钙液，常温脱 作的影响 ，本研究就室温下2种脱钙液的脱钙效果以 钙。两组牙齿待软至扩大针可无阻力穿通时取出，流 及对石蜡切片HE染色效果的影响进行了对比探讨。 水冲洗 (复合酸组冲洗时间延长至 12h)，梯度乙醇脱 1 材料与方法 水 ，二甲苯透明，石蜡包埋。切片时，刀刃与组织包埋 1．1 材料 来源和 实验分组 牙齿标本取 自2011年 块成 5。角 ，匀速慢行 ，厚约5 m。每个标本取3张，用 3 月广东省 口腔医院因治疗需要而拔除，牙齿发育 于 HE染色。 完全、牙冠完整、未见充填物及 明显龋坏或微裂的牙 1．5 统计学方法 采用 SPSS13．0统计软件进行完 齿。将新鲜拔除的 184颗牙齿分为两组 ，各组数 目见 全随机设计资料的方差分析。 表 1 2 结果 表 1 两组牙齿依据牙位分类的数 目 颗 2．1 2种脱钙法完成脱钙所需时间 在操作时间上 EDTA组