原代小胶质细胞及神经元细胞培养不同纯化方法的比较.pdfVIP

广东医学 2012年 3月 第 33卷第6期 GuangdongMedicalJournalMar．2012，Vo1．33，No．6 ·723 · 霭 曲巧干霸已 原代小胶质细胞及神经元细胞培养不同纯化 方法的比较冰 王宝萍 ，李东风 ，徐书雯 。南方医科大学研究生院(广州510515)；广东省人民医院、广东省医学科学院 医学研究中心，神经科、广东省老 年医学研究所、广东省神经科学研究所(广州 510080) 摘【要】 目的 探讨建立简便高效的原代小胶质细胞及神经元培养和纯化方法。方法 神经元与胶质细胞 混合培养后，采用温和胰酶消化法、恒温振荡法、利多卡因分离法及手摇法分离纯化小胶质细胞，无血清培养法及 阿糖胞苷法分离纯化神经元 ，细胞计数、流式细胞术及细胞化学染色鉴定小胶质细胞及神经元。结果 手摇法分 离纯化小胶质细胞与温和胰酶消化法、恒温振荡法、利多卡因分离法比较，细胞产量更高、活性更好 ；无血清培养 法培养神经元比阿糖胞苷法细胞纯度更高、活性更好，形成神经网络结构的时间也更早。结论 手摇法分离纯化 小胶质细胞是产量最高、简便、经济的方法，而无血清培养法更能提高神经元的纯度及活性。 【关键词】 小胶质细胞；神经元；原代培养；纯化方法 Comparison ofdifferentpurified methodsin cultureofprimary microgliaand neuronculture． WANGBao— ping ，LIDong-feng，XUShu～wen． GraduateSchoolofSouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515，China Correspondingauthor：XU Shu—wen．Tel：0086—02070712． 【Abstract】 Objective Toestablishaneasyandeffectivemethodforcuhureandpurificationofprimarymicroglia andneurons．Methods Mildtrypsinization，mechanicalshaking(37~C2hat250r／min)，lidocainehydrochlorideand handshakingmethodswereappliedforisolationandpurificationofgliasfrom mixedgliasandneuronscuhure，whileneu- ronswithneurobasalmedium andcytarabinedewingmethods．Allthepurifiedcellswerecounted．Thepurityofisolated microgliaandneuronwereassessedbyflowcytometriyandimmunocytochemitry，respectively．Results Thehandshaking methodofrisolationofmicrogliaswasprovedwithhighestefficacyandvivacity，andSOwastheneurobasalmedium method ofrneurons．Conclusion ItSaproductiveandeconomicmethodofhandshakingmethodinpurificationofmicroglia，and SOiSneurobasalculturemethodforneurons． 【Keywords】 microglia；neuron；pfimariyculture；purification 目前阿尔茨海默病 (AlzheimerSdisease，AD)的病 同时原代培养较细胞株或细胞系培养更接近于体内环 因仍不清楚，尸检发现AD患者脑组织 内存在炎性老 境 ，相对更好地反映真实的状况。炎症反应的最终作 年斑块。研究发现炎性介质在 AD病变区内表达上调 用靶细胞之一是神经元 ，它通过直接损伤或破坏神经 且参与AD的病变发展 ；细胞外纤维性 AI3沉积可引起 元的内环境来加重 AD病情 的发展，因此体外建立神 局灶急性期反应蛋白、细胞因子及其他炎