反义DNA和RNA：治疗病毒感染的新策略（下）.pdfVIP

维普资讯 个不超过4．5cm，并且总的肿瘤直径不超过8cm)的患者达到了75％的5年存活率。超出这些 标准的患者移植后也有5O％的 1年存活率。 尽管这些结果令人鼓舞，但这些数据是基于那些即使病理上超出米兰标准而在影像学上 符合标准的患者中得来的。还没有报道关于在影像学上进展的患者中应用这些扩展标准的前 瞻性研究。在其他研究中，等待患者退出的预测因素已经包括单个病变超过 3cm或者 3个结 节。MELD分配应该被进一步研究以便于提炼出对HCC患者基于相似的特征和不同退出风险 的优先权。应该进行进一步的前瞻性研究来发现HCC结局的其他可能预测因素，包括肿瘤等 级、是否侵犯微血管及肿瘤标记物等。 (未完待续) (编译 姚勤伟；审校 杨月) 反义DNA和RNA：治疗病毒感染的新策略 (下) JlYuan，etal (原载：Anti-InfectiveAgentsinMedicnialChemistry，2006，5：367-377) (接上期) 2．2siI A的化学修饰 siRNA的基因沉默效率还依赖于它的稳定性。未修饰的双链 RNA 比单链RNA更稳定，使用化学修饰的碱基合成sLRNA可进一步提高其稳定性和延长其抑制 效应。广泛使用的化学修饰通常为核糖的2’位置，包括2’一O一甲基核糖、2’一O一丙烯基 核糖、2’一脱氧尿苷、2’一氟 2’脱氧尿苷、2’一氟 2’一脱氧胞苷酸等。同义和 ／或反义 链2’核糖位置完全替代的的siRNA分子不能诱导RNAi，然而 3’突出部分或碱基配对部位 的2’核糖修饰增强其在血浆中的稳定性同时不丧失活性。另一个常被修饰的是主链部分。有 几项研究提示具有磷硫酰主链的siRNAs活性增强，但随修饰程度的增加活性反而下降。主链 修饰还可将磷酸二酯键中的非共价氧被等电子的甲硼烷替代，这种甲硼磷酸化修饰的siRNAs 比天然siRNAs更有效，与硫代修饰siRNAs相比抵抗核酶降解能力更强而毒性更低。有研究 表明恰当化学修饰的siRNAs稳定性好、能与靶位更有效结合，改善其药代动力学特性的同时 却不影响其内在效能。 2．3载体介导的siRNA表达 采用化学合成的siRNAs使基因表达沉默是研究中最常用的方 法，但缺乏有效载体使其进入细胞内使得其作用短暂，因此限制了它的应用。一些学者研制 了体内siRNA表达构造，可以稳定调节基因表达，或在诱导时调节基因表达。这些构造通过 不同途径实现，包括RNApolII指导的长发夹RNA表达、RNApolIII串联启动子控制的 短RNA表达、RNApolIII催化的短发夹 RNA (shRNA)表达，后者在 RNApolIII启 动子作用下，可产生有发夹间隔的l9—29nts的重复片断的shRNAs，shRNAs经Dicer酶处 理后进入RNAi途径。 尽管携带shRNA的质粒也可短暂或长期转染入哺乳动物细胞，但很难转入原代细胞或体 内应用。为克服这缺陷，一些学者使用逆转录病毒载体将siRNAs转入细胞，致癌病毒载体和 慢病毒属载体是被应用的两种类型，前者来源于慕洛尼小鼠白血病病毒 (MoMULV)或小鼠 千细胞病毒 (MSCV)，后者来源于 HIV—l。Paddison等人发现携带 U6-shRNA 构件的 MoMULV和 MSCV可以稳定地启动RNAi，这一途径可旁路激活衰老信号引起形态转变却 ． 30． 维普资讯 不伴有生长停滞现象。 慢病毒载体比致癌病毒载体更适合用于基因转移载体。首先，它可以转染多种末端分化、 非分裂的细胞，例如多种哺乳动物的造血干细胞，携带 shRNAs的慢病毒载体可以使原代突 触细胞和 T淋巴细胞的各种基因沉默。致癌病毒载体主要转染胚胎干细胞，值入前胚胎发育 过程中不能进行前病毒转录 ，因此引起所携带基因的丢失。慢病毒载体转入小鼠或人胚胎干 细胞的基因不会沉默，因此成为制造转基因动物的良好工具，特别适合于无胚胎干细胞系不 能通过靶基因的同源重组实现转基因过程的动物。最近报道采用慢病毒载体转染胚胎干细胞 或胚泡，通过其所携带siRNA可稳定地沉默靶基因，能