辛伐他汀对内皮细胞NADPH氧化酶表达和活性氧生成的影响.pdfVIP

· 1276 ‘ 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2011Sep；27(9)：1276～8 网络出版时间：2011-8—159：02 网络 出版地址 ：http：／／www．cnki．net／kcms／de．tait／34．1086．R0902．021109．1276_ 022．html 辛伐他汀对内皮细胞 NADPH氧化酶表达和活性氧生成的影响 王 蕾，舒 旭，伍世挥，吴和平，舒筱灿，罗 海 (怀化医学高等专科学校基础医学部，湖南 怀化 418000) doi：10．3969／j．issn．1001—1978．2011．09．022 1 材料与方法 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001—1978(2011)09—1276—03 1．1 主要材料 M199培养基、HEPES、明胶和Tr— 中国’图书分类号：R322．123；R329．24；R345．4；R972．6； izol为Gibco产品，逆转录试剂盒为 PROMEGA产 R977．3 品，细胞内ROS检测试剂盒购 自江苏碧云天公司， 摘要：目的 探讨辛伐他汀对内皮细胞NADPH氧化酶表达 胎牛血清为HYCLONE产品。 及活性氧生成的影响。方法 以不同浓度辛伐他汀和 10 1．2 方法 otol·L 辛伐他汀不同处理时间培养内皮细胞 ，用 RT．PCR 检测 NADPH氧化酶各亚单位 (NOX4、NOX2、p67phox、 1．2．1 HUVEC分离培养 用 Ⅱ型胶原酶消化法分 p22phox、RAC)表达的变化；用流式细胞仪检测细胞 内活性 离培养 HUVEC，免疫荧光法检测Ⅷ因子进行鉴定。 氧的浓度。结果 辛伐他汀能下调NOX4、p67phox、p22phox 1．2．2 细胞处理 不同浓度辛伐他汀分组：①不加 mRNA表达 ，同时下调细胞内活性氧浓度。结论 辛伐他汀 辛伐他汀对照组；②10 。mol·L 辛伐他汀处理2 可能通过下调 NADPH氧化酶表达，以减少活性氧生成从而 h组；③10一mol·L 辛伐他汀处理2h组；④10 达到抗氧化损伤作用。 mol·L 辛伐他汀处理2h组。辛伐他汀不同处理 时间组：①不加辛伐他汀对照组；②10一mol·L 关键词 ：NADPH氧化酶；活性氧；辛伐他汀；NOX4；NOX2； p67phox；p22phox；RAC 辛伐他汀处理0．5h组；③10～mol·L 辛伐他汀 处理 1h组；④10一mol·L 辛伐他汀处理2h组。 动脉粥样硬化严重危害人类健康；机体处于氧 1．2．3 逆转录聚合酶链反应检测 内皮细胞 内NAD． 化应激状态，自由基增加导致血管内皮细胞损伤，是 PH氧化酶各亚基表达 用TRIzol试剂盒提取细胞 动脉粥样硬化形成的危险因素 J。体 内有多种酶 总RNA；逆转录反应按照PROMEGA公司试剂盒的 参与ROS生成，目前NADPH氧化酶被认为是血管 实验程序完成；PCR引物序列见 Tab1。PCR产物 内生成 ROS的主要酶体，它是由多个亚基组成的酶 在 1．5％琼脂糖凝胶中电泳；电泳条带采用 Pharma． 复合体，主要包括 5个亚组分，其中gp91phox和 ciaBiotech凝胶成像系统分析。 p22phox为胞膜组分，p47phox、p67phox及Rac为胞 质组分 j。已发现 的 gp91phox同工酶家族有 Tabl Sequenceofprimer NOX1、NOX2(gp91phox)、NOX3、NOX4、NOX5等成 员 ，内皮细胞主要表达NO