RNAi沉默NF-κB p65对小鼠巨噬细胞细胞因子表达的影响.pdfVIP

· l264 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiolo 20 !(Z)； 二 [文章编号] 1000—4718(2011)07—1264—06 RNAi沉默 NF—KBp65对 小鼠巨噬细胞细胞 因子表达的影响 石 榴， 李 理， 袁伟锋， 黄文杰 (广州军区广州总医院呼吸内科，广东 广州510010) [摘 要] 目的：探讨 RNA干扰 (RNAi)技术在抑制 NF—KBp65表达、调控 LPS活化后 巨噬细胞细胞因子 表达中的应用。方法：利用阳离子脂质体将 NF—KBp65小干扰RNA(siRNA)瞬时转染人Ana一1细胞，RT—PCR 及Westernblotting法检测其沉默效率 ，ELISA法检测LPS(1mg／L)刺激下0h．4h、12h和24hAna一1细胞培养上 清中TNF—ot、IL一1B、IL一6和 IL—l0浓度。结果：NF—KBp65siRNA转染24h后，NF—KBp65在基因水平及蛋 白水平表达均被明显抑制 (P0．05)。RNA干扰组Ana一1细胞培养上清中细胞因子TNF—ot、IL一1p和 IL一6表 达在相应时点内均较对照组明显降低 (P0．05)，IL一10表达显著升高，在 12h和24h差异显著(P0．05)。结 论：体外实验初步证实 RNAi技术能有效沉默小 鼠巨噬细胞NF—KBp6 基因的表达，下调其下游调控的促炎症细 胞因子TNF— 、IL一1B、IL一6及上调抑炎症细胞因子 IL一10的表达，从而抑制过度的炎症反应。 [关键词] RNA干扰 ；NF—KBSS5；细胞因子类；Ana一1细胞 [中图分类号] R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．07．003 InhibitionofNF—KB prSexpression byRNAiaffectsproduction 0fin- flammatorymediatorsinLPS—-activatedmousemarcophages SHILiu，LILi，YUANWei—feng，HUANGWen—jie (DepartmentofRespiratoryMedicine，GeneralHospitalofGuangzhouMilitaryCommandofPLA，Gnangzhou510010， China．E—ma il：huangyelu1029@vp／．163．corn) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetheeffectsofchemicallysynthesizedsmallinterferingRNA (siRNA)targeting toNF—KBp65expressionontheproductionofinflammatorymediatorsinlipopolysaccharide(LPS)一activatedmouse maerophageAna一1cells．METHODS：ThesiRNA tragetingtomouseNF—KB p65 mRNA wastransfectedintoAna一1 cellsandtheratesoftranscriptionandtranslationofNF--KBp65weredetectedbyRT——PCR andWestern blotting24haf- terrtansfecfion．Thecytokines(suchasTNF— ，IL一1B，IL一6nadIL一10)inthesupernatnatofAna一1cellsactiva- tedbyLPS(1mg／L)weremeasuredbyELISAat0h，4h，12hand24haftertransfection．RESULTS：Theexpression oftheNF——KBp65atmRNA nadproteinlevelsinAna——1cellswasspecificallyna dextensivelysuppr