实时定量聚合酶链反应法检测人周围血淋巴细胞受照后GADD45基因表达的改变.pdfVIP

· 454· 中国职业医学 2008年l2月第35卷第6期 ChinOccupMed，December，2008，Vo1．35，No．6 文章编号：1000—6486(2008)06—0454—04 【论 著】 实时定量聚合酶链反应法检测人周围血淋巴细胞 受照后 GADD45基因表达的改变 刘莉 ，佘义 ，赵卫东。， 李进 ， 王芹 ， 田丽丽 ，姜恩海 摘要：目的 建立辐射诱导人淋巴细胞 GADD45基 因表达定量检测技术，探讨GADD45基因表达变化作为辐射生 物剂量计的可行性。方法 健康人周围血经x射线照射后分离淋巴细胞，提取总RNA，反转录成eDNA，利用实时荧光 定量聚合酶链反应 (PCR)法检测GADD45基因经不同剂量照射 (0～8Gy)、2Gy照后不同时间(O～72h)的mRNA表达 水平，以管家基因GAPDH为内参进行定量分析。结果 照射后GADD45基因在转录水平表达呈剂量依赖性增加，4Gy 照射时达到峰值，8Gy仍然保持在较高水平，GADD45基因表达改变存在线性剂量一效应关系，其线性回归方程为夕= 3．408+1．528x， =0．787。2Gy照射后GADD45基因mRNA表达在照射后 1h呈现上升趋势，在4h时迭峰值，照射后 72h基因表达仍未恢复到初始水平。结论 实时荧光定量PCR检测GADD45基因表达方法具有 良好的敏感性、重复性 和剂量一效应关系，有可能成为新的辐射生物剂量计。 关键词：GADD45基因；生物剂量计；基因表达；实时荧光定量PCR 中图分类号：)(591 文献标识码：A Real-timePCR detectionofthechangeofGADD45geneexpressioninirradiatedlymphoyetes LIU Li，SHE Yi，ZHA0Wei．dong，etal (InstituteofRadiationMedicine，ChineseAcademeofMedicalSciences，Tianjin300192，China) Abstract：0bjective Toestablishthequantifyingtechnologyforgeneexpressionchange(GEC)ofGADD45afterX-ray irradiation．nadtodiscusshtefeasibilityofhteGEC ofgeneC^DD4sasaradiationbiodosimeter．M ethods Healthywhole· bloodmodelWas usedtoseparatelymphocytesafterirradiation，totalmRNAwasextractedandteversetranseriptedtogeteDNA ， SYBR Greenreal-timePCR technoloyg Was usedtoassaygeneGADD45expressionatmRNA levelexposedtodifferentdoses． ThenhousekeepinggeneGAPDHWas chosenandappliedtorectifyhtequantityofeverydose．Results nIeup—regulationof gene GADD45Was dose—dependentintranscriptionlevelafterirradiation．Itreachedhtepeakat4Gyirradiatonandstillstayedinrela- ● fivdyhiShlevelat8Gy．AlinearregressionequationWasestablishedas夕=3