对铜绿丽金龟幼虫有活性的苏云金芽孢杆菌菌株的分离及鉴定.pdfVIP

^ 0 T ‘ llORICULTURAE 华北农学报 ·2008，23(6)：81．83 DR 印tl-SIHICll 对铜绿丽金龟幼虫有活性的苏云金芽 孢杆菌菌株的分离及鉴定 胡晓婷 ，宋 健 ，王容燕2，杜立新2，曹伟平 ，王金耀2，冯书亮2 (1．河北大学 生命科学 学院，河北 保定 071000； 2．河北省农林科学院 植物保护研究所 ，河北省农业有害生物综合 防治工程技术研究中心 ，河北 保定 071000) ／ 摘要 ：为了发掘新 的斑资源 ，从 3种不同土壤类型的样 品中分离得到了285株苏云金芽孢杆菌菌株 。采用杀虫 活性测定方法从 中获得 了 13株对铜绿丽金龟幼虫具有高毒力的菌株 。利用 PCR—RFLP鉴定体系和 SDS。PAGE蛋 白分 析法，研究了这 13株苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋 白基因类型和晶体蛋 白表达情况。结果显示 ，有 12株均含有编码 毒杀铜绿丽金龟幼虫毒素蛋 白的cry8Ca基因，而FTL53没有鉴定到已有的基因类型。这 13株菌的伴孢晶体都含有分 子量为 130kDa的蛋白。本研究为不断发现新型的、具有高毒力的 cry毒素基 因奠定了基础。 关键词 ：苏云金芽孢杆菌 ；PCR—RFLP；金龟子幼虫 中图分类号 ：$476．11 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—7091(2008)06—0081—03 Isolation andIdentification ofBacillusthuringiensisStrains ToxictoScarabaeoidaeLarvae HU Xiao—ting一，SONG Jian ，WANG Rong—yan ，DU Li—xin ， CAO Wei—ping ，WANGJin—yao ，FENG Shu—liang2 (1．CollegeofLifeSciences，HebeiUniversity，Baoding 071000，China；2，InstituteofPlantProtection，Hebei AcademyofAgricultureandForestrySciences，IPM CentreofHebeiProvince，Baoding 071000，China) Abstract：InordertofindingnewBtresource，twohundredsandeighty-fiveBacillusthuringiensiswereisolatedfrom threedifferentsoil-typesamples．Thirteenofthem wereshowntobehighlytoxictoscarabaeoidaelarvae．Byusingofthe PCR—RFLPsystem andSDS—PAGE．thetypesofgenecryofthe13 Bacillusthuringiensisisolatesandtheexpressionof insecticidalcrystalproteinswereanalyzed．Theresultisthattwelveofthem havethecry8Cagenewhichcodingthecrystal proteinskillScarabaeoidaelarvae．FTL53couldntbefindedanygene．ThethirteenBtstrainsexpress130kDaprotein． Th isresearchlaysafoundationtofindnewandhightoxincrygene． Keywords：Bacillusthuringiensis；PCR—RFLP；Scarabaeoidaelarvae 苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis，简称 Bt) 性 ，快速筛选优 良菌株 以及分离克 隆新 的 c 基 因 是一种革兰氏阳性芽孢杆菌 ，其在形成芽孢的过程