4种梨的多酚氧化酶基因克隆及其序列比较.pdfVIP

n C T n ~GRICULIURgE 华 北农 学报 ·2008，23(6)：68．7l BOREALI-SIHICll 4种梨的多酚氧化酶基因克隆及其序列比较 李桂琴 ，李会宣 ，刘 坤2，许冬倩 ，张玉星 (1．河北农业大学 园艺学院，河北 保定 071001；2．河北经贸大学 生物科学与工程学院，河北 石家庄 050061) 摘要 ：以4种不同来源的梨基 因组 DNA为模板 ，根据已经发表的多酚氧化酶基 因序列设计引物 ，利用 PCR技术 ， 克隆到 了鸭梨 、雪花梨 、砂梨 、黄冠梨约 1．8kb的完整 多酚氧化酶基因，将纯化后 的扩增产物克隆到质粒 pGEM—Tvee tor中，转化DH一5 菌，挑选阳性克隆进行测序。利用Clustalx软件对 PPO核苷酸序列进行了同源性分析，用DNAStar软 件对PPO核苷酸序列进行进化树分析 ，并进行部分植物 PPO氨基酸的同源性分析 。结果表 明，4种梨多酚氧化酶基 因 的蛋白编码 区含有 1782个核苷酸 ，鸭梨基 因已经在 GenBank上登录，登录号为 EU408225。梨多酚氧化酶基因与其他 植物中的多酚氧化酶基因有较 高的相似性，尤其在铜离子结合部位，所有的植物基本上一致；5种梨的同源性高达 98％。基于植物 PPO基 因核苷酸序列的分子进化树显示 ，可分为两大类 ，梨的多酚氧化酶可以与大多数 的木本植物 聚合成一个组 。 关键词 ：梨 ；PPO基因；克隆；序列 比较 中图分类号 ：Q785 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—7091(2008)06—0068—04 CloningandSequenceComparisonofPolyphenolOxidaseGenes from FourKindsofPears LIGui—qin ，，L1Hui—xuan ，LIU Kun ，XU Dong—qian ，ZHANG Yu—xing (1．CollegeofHorticulture，AgricuhuralUniversityofHebei，Baoding 071001，China；2．BiologicalScience andEngineeringInstitute，HebeiUniversityofEconomicsandBusiness，Shijiazhuang 050061，China) Abstract：PCRswereperformed ongenomicDNAsoffourpearcuhivarsSandpear，Huangguanpear，Xuelipear， Yalipearusingprimersderivedrfom sequencesofpreviouspublishedPPO．Thetargetbandswererecoveredandpurified． Th efragmentswereligatedwiththeplasmidofpGEM—TVectorbythemethodofdirectT—A cloning．Themixturesofliga· tionweretransformed intoDH一5aandthepositivecloneswerescreenedandsequenced．Phylogenetictreeanalysisofthe plantPPo genesequencesweremadebythesoftwareofClustalxandDNAStar．Theresultsshowedtheseenzymescoding regioneachcontaining1782oligodeoxynucleotidesandtheobtained Ppo geneofYalipearwasregisteredinGenbank． whoseaccessionnumberisEU048225．Thefivetypespearsharedhighsequencehomologyof98％ ．The PP0 genes weredivided intotwogroupsbasedonphylogenetictreeanalysisoftheplantPPo genesequences．The PPo genesof thepearscanbe