表达鸡白细胞介素18重组禽痘病毒的构建及其表达产物生物学活性的检测.pdfVIP

n C T n ilORICULTURAE 华 北农 学报 ·2008，23(6)：6．10 BOREILI—SIHICll 表达鸡 白细胞介素 18重组禽痘病毒的构建及 其表达产物生物学活性的检测 陈红英 ，黄青云 ，崔保安 ，李新生 ，管 倩 ，刘金朋 (1．河南农业大学 牧医工程学院，河南 郑州 450002；2．华南农业大学 兽医学院，广东 广州 510642) 摘要 ：为构建表达鸡 IL-18的重组禽痘病毒 ，将含痘病毒启动子 IU2EP2驱动 的鸡 ，￡厂J8基因插入到禽痘病毒转移 载体 pSY681中，获得重组转移载体 pSY681／ChlL一18。将 pS~681／ChlL一18转染 已感染亲本禽痘病毒 S-FPV一017株 的鸡 胚成纤维细胞 ，使其在鸡胚成纤维细胞 内与禽痘病毒基因组发生 同源重组，产生表达鸡 8的重组禽痘病毒 rFPV ChIL-18。在含有 x—gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后 ，对重组病毒 rFPV—ChIL-18又进行了多次蚀斑克隆。以重 组禽痘病毒 DNA为模板 ，利用鸡 ，￡广J8基 因特异引物进行 PCR，扩增 出 1条约 0．6kb的带 。收集含鸡 IL-18蛋 白的细 胞上清液进行 MrITI、试验 ，表达 的产物能明显提高鸡淋巴细胞的转化率 。 关键词：鸡 儿J8基因；重组禽痘病毒；构建；生物学活性 中图分类号 ：$852．4；Q786 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—7091(2008)06一OOO6—05 ConstructionofRecombinantFowlpoxVirusExpressingChicken Interleukin一18andItsBiologicActivityDetection CHENHong-ying，HUANGQing—yLffl2CUIBao—an，LIXin—sheng，GUANQian，LIUJin—peng (1．CollegeofAnimalHusbandryandVeterinary，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou 45(~Y2，China； 2．CollegeofVeterinaryMedicine，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou 510642，China) Abstract：Inordertoconstructtherecombinantfowlpoxviruses(rFPV)expressingchickenIL一18，thechicken儿一8 cDNAwasclonedintoEcoRI siteofpSY538plasmidandthensubclonedinto I siteofpSY681plasmidcontaining LacZ genetogeneratetherecomb inantplasmidpSY681／ChIL-18．Therecomb inantplasmidwastransfectedonthechick— enembryofibmblastscell(CEF)thatwaspre-infectedwithS—FPV-017．ByscreeningofblueplaquesontheCEFoverlaid withagarcontainingX—gal，therFPV-ChIL一18recombinantswereobtainedandidentifiedbyPCR．Recomb inantchicken IL一18induced invitrotheproliferationofConA—stimulatedchickensplenocytesinMTFassay． Keywords：Chickeninterleukin一18gene；Recomb inantfowlpoxvirus；Construction；Biologicactivity 禽痘病毒是 目前所知最大的动物病毒 ，至少可 用l4j。所以，为了提高禽痘病毒的安全性 ，研究者将 容纳25kb的外源基因，是构建多价疫苗的理想载