大黄酚和牛血清蛋白相互作用的电化学／光谱性质研究.pdfVIP

第24卷第6期 分 子 科 学 学 报 V0I．24No．6 2008年 12月 jOI．爪NAL OF MOLECULAR SCIENCE December2008 [文章编号]1000-9035(2008)06-0411．05 大黄酚和牛血清蛋 白相互作用的 电化学／光谱性质研究 李守君 ，方洪壮，武冬梅，孙长海，丁立新，赵志宇，单静影 (佳木斯大学化学与药学院，黑龙江佳木斯 154007) [摘 要] 在pH=4．0的Britton．Robinson(B．R)缓冲体系中，应用循环伏安法、示差脉冲伏安 法和紫外光谱法对大黄酚与牛血清 白蛋白(BSA)相互作用的电化学／光谱性质进行研究．结果 表明，二者结合生成了一种非电活性的超分子化合物．BSA的存在导致大黄酚氧化还原峰电流 降低，峰电位基本不变，峰电流的下降值同所加入的BSA浓度在一定范围内呈线性关系．线性 范围为 5．0×10_。。一1．0×10～moL／L，检 出限为3×10_m‘ol／L． [关键词】 大黄酚；牛血清白蛋 白；电化学；光谱 [中图分类号] 0611 [学科代码] 150·15 [文献标识码】A 在一定条件下，药物分子与蛋 白质之间可通过分子间作用力形成超分子化合物[1-3]，考察蛋 白质与 药物分子的相互作用，对阐明生物大分子与小分子配体间相互作用机理和规律具有重要的意义[4-5]．这 种超分子化合物与小分子配体本身相比在电化学和光谱性质上有明显的变化，以此为基础建立许多蛋 白质的分析方法 ]，但文献报道多以光谱法为检测方法[．电分析化学法具有简单、快捷、高灵敏度和高 选择性等特点，为蛋白质的生物电化学研究提供了重要的研究方法[sq3]．大黄酚是中药大黄中的一种有 效成分，属于蒽醌类衍生物u ，具有电化学氧化还原性质，对大黄酚与牛血清 白蛋 白(BsA)相互作用的 研究尚未见报道．本文主要研究在酸性 B—R缓冲溶液中大黄酚与BSA相互作用的电化学／光谱性质，大 黄酚修饰电极可望作为蛋白质的电化学探针用于蛋白质的测定． 1 实验部分 1．1 仪器与试剂 LK2005电化学工作站 (天津市兰力科化学电子高科技有限公司)；KQ．500DE型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司)；UV757CRT型紫外一可见分光光度计 (上海精密科技仪器公司)；PB一20标准 型pH计(德国赛多利斯股份公司)；三电极系统：玻碳电极 (GcE)为工作电极，饱和甘汞电极(sCE)为参 比电极，铂丝电极为对电极． 大黄酚(ARS)(中国药品生物制品检定所)，5．0×10～mol／L，使用时再进行稀释；牛血清 白蛋 白 (BSA)(北京奥博星生物技术责任有限公司)，相对分子质量为65000，1．0×10,mol／L，4oC保存；Brit— ton．Robinson(B—R)系列缓冲液；高纯N2(99．99％)；所用试剂均为分析纯，水为石英亚沸二次蒸馏水． 收稿 日期：2008-07-23 基金项目：黑龙江省自然科学基金资助项 目(B200609)，黑龙江省教育厅科技项 目；佳木斯大学科技项 目(12007-89)，黑龙 江省教育厅重点实验室项目． 联系人简介：李守君(1962．)，教授，硕士研究生导师，主要从事生物电化学研究． E-mail：shoujun1962@163．eom 412 分 子 科 学 学报 第24卷 1．2 实验方法 电极预处理：先用小号金相砂纸将玻碳电极磨光滑，再用0．05 的a—Al2o3悬糊液抛光成镜面，依 次用乙醇和水超声清洗，用氮气吹干备用． 以pH=4．0B．R缓冲液为支持电解质，加入适量的大黄酚与牛血清 白蛋白，与未加BSA的大黄酚溶 液比较，用循环伏安法、示差脉冲伏安法和紫外光谱法对该体系进行研究和测定．进行电化学实验时须 向溶液中通入高纯N2除氧，测定过程中溶液上方保持N2气氛． 2 结果与讨论 2．1 缓冲溶液的选择 分别在HAc—NaAe，K2HPO