猪带绦虫TSOL18-SP蛋白的原核表达及其多抗的制备.pdfVIP

2008年 12月 甘 肃 农 业 大 学 学 报 第 43卷 第 6期 14~18 JOURNALOFGANSU AGRICULTURALUNIVERSITY 双 月 刊 猪带绦虫 TSOL18一SP蛋 白的原核表达 及其多抗的制备 。 陈晓宇 ，丁军涛 ，骆学农。，王 颖 ，刘 斌h。，张少华 郑亚东 ，景志忠 ，才学鹏 (1．甘肃农业大学动物医学院．甘肃 兰州 730070；2．中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学 国家重点实验室，甘肃省动物寄生虫病重点实验室，甘肃 兰州 730046) 摘要：对 TSOL18基因中4个碱基进行定点突变，并截去N端 16个氨基酸的信号肽，构建pGEX—TSOL18．SP 原核表达载体 ，IPTG诱导表达后进行产物的SDS及Westernblot分析；用改造的纯化蛋白免疫家兔后采集 血清，经琼脂双扩散试验检测血清抗体效价．结果表明：TSOL18基因改造后长度为 345bp，共有 7个碱基发生突 变，但氨基酸序列没有改变，与GenBank收录的TSOL18基因核苷酸序列相似性为 97％，氨基酸序列相似性为 100％．SDS及Westernblot分析表明：改造的重组菌诱导后可高效表达可溶性 目的蛋 白，且 TSOL18一SP分 子量约为 38．7kD，与猪带绦虫六钩蚴阳性血清反应性强；琼脂双扩散法测定免疫兔血清抗体效价为 1：32～64， 说明表达的TS0L18一SP蛋 白具有较好的免疫原性． 关键词：猪带绦虫六钩蚴 ；TSOL18；基因改造 ；原核表达；高免血清 中图分类号：S852．73 4 文献标识码 ：A 文章编号：1003—4315(2008)06—0014—05 ． 1广、rocaryotlc‘exPresS1O·n and1pol’ycl1onal1anti·body‘preparat1●On O±， Taeniasolium TSOL18一SP protein CHENXiao—yu’，DINGJun—tao ，LUOXue—nong。，WANGying。，LIU Bin’。，ZHANGShao—hua。， ZHENGYa—dong。，JINGZhi—zhongZ，CAIXue—peng。 (1．CollegeofVeterinaryMedicine，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China；2．KeyLaboratoryofVeterinary ParasitologyofGansuProvince，KeyLaboratoryofVeterinaryPublicHealthofMinistryofAgriculture，StateKey LaboratoryofVeterinaryEtiologicalBiology。LanzhouVeterinaryResearchInstitute，CAAS，Lanzhou730046．China) Abstract：Inorderto improvethebiologicactivityandstabilityoftherecombinant18kD antigen (TSOL18)ofTaeniasolium onchospere，theexpressivevectorofpGEX—TSOL18一SPwasconstructedwith themodifiedT．solium onchospereTSOL18genebytherite—directedmutagenesisof4basesinitscoding sequenceandremovingofthesequencefragmentencodingitsN—terminalsignalpeptide．Afterinducedwith IPTG，theexpressedproteinswereanalyzedby