改进的表面张力辅助去核法对小鼠卵母细胞去核的研究.pdfVIP

维普资讯 中国畜牧兽医 2007年第 34卷第 2期 遗传繁育 ·67 · 改进的表面张力辅助去核法对小鼠 卵母细胞去核的研究 李井春 ，方南洙 (延边大学农学院动物遗传育种与繁殖实验室，龙井 133400) 摘要：为了探讨改进的小鼠表面张力辅助去核法(STA)的可靠性，本试验用改进的表面张力辅助去核法与表面张力辅助 去核法对小鼠卵母细胞进行去核操作，比较其去核操作效率。结果发现，改进的表面张力辅助去核法能显著减少去核操作时 间，去核率与表面张力去核法无显著差异 。改进的小 鼠表面张力辅助去核法是一种适用于小 鼠卵母细胞操作 的快速、简单、 实用的去核方法 。 关键词 ：小鼠；改进 的表面张力辅助去核法 ；去核 中图分类号：Q813 文献标识码 ：B 文章编号：1671—7236(2007)02—0067—02 自从 1997年 Dolly体细胞克隆羊诞生以来 ，应 卵母细胞即用于去核操作。 用体细胞核移植技术先后在小 鼠、牛、猪、兔和狗等 1．3 改进 的STA法(MSTA)去核 将带有第一极 获得核移植后代。好的去核方法是核移植成功的关 体 (PB1)的卵母 细 胞 移入 含 5 z／g／mlCB 的 键因素之一。目前通常采用的方法主要有 wⅢaden HEPES-CZB显微操作液滴 (40 1)中，室温处理 去 核 法 (Willadson，1986)、McGrath-Solter法 10min，在显微镜下用操作针拨动卵母细胞 ，调整焦 (McGrath等 ，1983)，其他 的去核方法都是 由上述 距见到极体在卵周 隙中，用 固定针固定使极体处于 方法经过改进而获得的。每种去核方法都有其不足 时钟 3点位置 ，去核针 (平 口针)移到 3～4点或 2～ 之处 ，不是操作烦琐 、费时就是去核准确率不高 。目 3点间，针尖压到透明带上 ，调整去核针使针缓慢下 前 ，还没有一种较为理想 的去核方法来满足体细胞 降，这时透 明带被压到平皿底部，用去核针磨擦几 克隆技术发展 的需要。因此，作者对孟 庆刚等 下，透 明带被切开 1／5～1／4卵周长的切 口，移动载 (2001)的小 鼠表面张力辅助去核法 (STA)进行一 物台，使溶液的边缘缓慢 向卵母细胞靠近，在卵母细 些改进 ，来完善此法的不足 ，希望建立一种适用于小 胞接近溶液边缘移动的过程中，细胞核和极体可以 鼠卵母细胞操作 的快速 、简单 、实用的去核方法 。 被表面张力挤 出透明带。退下 固定管后透 明带封 1 材料与方法 闭，将核质体和卵母细胞分开 。 1．1 显微工具的制备 固定针先以手工拉制，然后 1．4 表面张力辅助去核法 (STA) STA法操作过 在 自制的细焰酒精灯上拉成外径约 90p．m，内径约 程参见孟庆刚等(2001)。 20p．m 的微管 ；去核针用毛细玻璃管在拉针仪 (PN一 1．5 统计分析 试验结果用卡方 (x。)检验进行统 30，Japan)上拉制成细部长约 0．8mm，末端有尖的 计分析。 玻璃针和其 内径为 8～10 m 的平 口针。 2 结果 1．2 超数排 卵 7～12周龄的雌性昆明白系小 鼠， 从表 1可知，在去核操作时间上 ，改进后 的 隔日腹腔注射 PMSC和 hCG(宁波激素制品厂)各 1O STA法 (40s／枚)与 STA法 (78s／枚)相 比能够大大 IU／只。于hCG注射后 13~14h收集卵丘卵母细胞 缩短操作时间，二者差异显著 (PO．05)；在去核效 复合体(COCs)，COCs移入含有 0．1 透 明质酸酶的 率上 ，二者之 间差异不显著 。 HEP