鲤免疫应答相关基因的克隆与鉴定.pdfVIP

中国水产科学 2011年 9月，18(5)：1179—1188 JournalofFisherySciencesofChina 研 究简报 D0I：10．3724／SP．J．1118．2011．01179 鲤免疫应答相关基 因的克隆与鉴定 丰培金 ，王文东2，李伟2，卢强2 1．临沂大学 生命科学学院，山东 临沂 276005； 2．吉林大学 人兽共患病研究所，吉林 长春 130062 摘要：为研究鲤(CyprinuscarpioL．)白细胞免疫应答相关 的分子机理，以体外培养 的鲤外周血 白细胞为实验材料， 用荧光标记的mRNA 差异显示 (FluoroDDRT-PCR)技术，研究丝裂原(50gg／mLLPS、50~tg／mLPHA和50~tg／mL ConA)在刺激 白细胞 4、12和24h内诱导 白细胞免疫应答相关基因的mRNA表达差异，共获得 92个差异片段，其 中 87个片段有再扩增产物，再扩增率为 94．6％；将差异片段克隆，经 PCR鉴定，获得 81个阳性克隆，鉴定率为 93．1％；差异片段序列同源性功能分析结果表明，本研究共获得 3个免疫应答相关 的cDNA克隆，它们分别编码鲤 的蛋 白酶体激活因子PA28a亚基 、翻译延伸因子(EF．1)和基质金属蛋白酶 13(Mmp13)部分序列，为进一步研究这 些差异表达基因在鱼类免疫 中的作用机制奠定了基础。 关键词：荧光mRNA差异显示；鲤；白细胞；免疫应答相关基因 中图分类号：$94 文献标志码：A 文章编号：1005—8737一(2011)05—1179～10 近年来世界水产养殖业逐步向集约化、产业 答方面，炎症相关细胞因子都起着重要的作用 。 化方 向发展，大规模、高密度养殖和水环境污染 目前已克隆了鱼类肿瘤坏死因子 】、白细胞介 造成的水产养殖病害 日趋严重，与鱼病紧密相关 素 1p 等炎症相关细胞因子基因，并进行 了表 的鱼类免疫机制的研究和环境因素对鱼类免疫应 达分析 。2001年韩国学者 Lee等[12J报道克隆了鲽 答影响的研究已成为研究热点。 (Paralichthysolivaeeous)的IL8基因，2003年 Et本 目前，鱼类分子免疫学的研究获得重要进展， 学者又报道克隆了角鲨(Triakisscyllia)的IL8基因 如克隆了鲤(CyprinuscarpioL．)补体c3和 c4基 【l， 中国学者在 2005年分析了斑点叉尾~(Ictalu． 因并进行了蛋白分析 []，已对罗非鱼热休克蛋 punctatus)的IL8cDNA序列，研究了感染爱德 白HSP70t、鲤的金属硫因基因[cDNA进行了克 华 氏菌后斑点叉尾鲴 IL8的表达情况[141；对于虹 隆和表达研究，此外，还克隆了干扰素诱导产生 鳟浸泡感染杀鲑气单胞菌后肠道 中炎症相关细胞 的黏病毒抗性蛋 白基因[5]，其 mRNA表达水平 的 因子的表达 []也有研究，虹鳟感染多子小瓜虫后 高低和基因组限制性酶切图谱多样性(RFLP)结果 炎症相关细胞因子的表达也有报道 ，Seppola等 被用于虹鳟(Oncorhynchusmykiss)对传染性造血 】进行了大西洋鳕 (Gadusmorrhua)IL一1D、IL8 器官坏死病毒(IHNv)的敏感性研究 6【J。而分析病 和 IL．10的特性和表达分析研究，此类细胞因子 原微生物攻击鱼体后，免疫应答相关分子的表达 在鱼类免疫应答 中占有重要的地位 。 情况成为 目前研究的热点[卜引。不论是细菌还是病 鱼类外周血 白细胞 同高等脊椎动物血液 中的 毒，甚至寄生虫的感染，在参与鱼类早期免疫应 白细胞一样，是机体体液免疫和细胞免疫的重要 收稿 日期 ：2010—08—06；修订 日期：2010—10—24． 基金项 目：国家 自然科学基金项 目． 作者简介：丰培金 (1968一)，男，博士，副教授 ，