DNA微阵矩分析人软骨细胞体外老化过程中基因表达水平的变化.pdfVIP

维普资讯 2期 ChinJOrthooT N · l365 · 实 验 研 究 · DNA微阵矩分析人软骨细胞体外老化 过程中基因表达水平的变化 张 艳 柴 岗 刘 伟 崔 磊 曹谊林 摘【要】 目的 研究成人软骨细胞体外单层培养老化过程中基因表达水平的变化，初步探索人软骨细胞老化 发生的可能机制。方法 取体外培养的第 1代 (P)至第4代 (n)人肋软骨细胞，观察细胞增殖率，阿利新兰 (Alcianblue)法定量检测硫酸软骨素蛋白聚糖聚集体 (aggrecan)中糖胺多糖 (GAGs)含量，RT—PCR分析 I、Ⅱ型胶原 及aggreean基因表达量。以观察人软骨细胞体外老化过程。并采用DNA微阵矩技术对Pr及 P软骨细胞表达差异 的基因进行比较分析，P及 人肋软骨细胞基因表达水平差异≥2倍时，被认为差异具有显著性。 结果 n软 骨细胞从细胞增殖率 ，细胞中GAGs含量 ，Ⅱ型胶原及aggrecan基因表达量分析均明显低于 Pr软骨细胞 (P 0．01)。在 1000点的含有原癌基因、抑癌基因、细胞凋亡、应激反应蛋白基因和免疫相关基因的芯片分析中，P及 P4间存在差异的基因共36个，其中在P 中下调的基因 11个 ，主要为细胞外基质 、生长因子转录因子等，而在 P 中上升的基因共25个主要为蛋白酶类 、炎症因子及凋亡相关基因等： 结论 P软骨细胞呈现老化特征 通过 DNA微阵矩技术发现P老化细胞中基质合成相关基因表达下降，而降解酶类基因表达上升，致细胞外基质减少： 且细胞增殖有关基因表达的减少及凋亡因子的增加 ，老化细胞增殖率下降 【关键词】 软骨细胞； 老化； DNA微阵矩 ； 基因 【中图分类号】R329．28 【文献标识码】A 【文章编号】1671—7600(2004)12-1365．05 M icroarrayanalysisofage-relatedgeneexpressionofhumanchondrocytescultured invitro ZHANG Yah，CHAIGang，LIU Wei，CU1Lei，CAO Yi—lin DepartmentofPlasticSurgery，NinthPeople’sHospital，ShanghaiSecondMedicalUniversit) ShanghaiKeyLaborator)of TissueEngineering, ShanghaiTissueEngineeringCenter, Shanghai20001J， China SupportedbySub-project04ofChineseNational973Programs fG1999054304)andGrantsfromShanghaiScienceand TechnologyCommittee{OODJ14001一l} Correspondenceauthor： CAO Yi—lin 【Abstract】 Objective Chondrocytesbecomeagedeasilyduringinvitroexpansion．andareunabletoformcartilage upon invivotransplantation．Thisstudyisanattempttoexploreagingmechanism ofinvivoculturedhumanchondrocvtesby mieroarrayanalysisofgeneexpressionchanges． M ethods Thesparehumancostalcartilagefrom earreconstructionpa— tients(n=3，aged10—20)wasdigestedwithcollagenaseIItoisolatehumanehondrocytes(HCC)whichweretobeexpanded fromPito tostudycellaging．Ce