双齿围沙蚕金属结合蛋白（MPⅡ）基因克隆与表达.pdfVIP

中国水产科学 2011年 9月，18(5)：983—991 JournalofFisherySciencesofChina 研 究论 文 DoI：10．3724／SP．J．1118．2011．00983 双齿围沙蚕金属结合蛋 白(Me 基因克隆与表达 杨大佐 ，周一兵 ，陈雪 ，周笑孝 ，王斌 ，袁秀堂2，孙静波 1．辽宁省海洋生物资源恢复与生境修复重点实验室，大连海洋大学，辽宁 大连 116023； 2．国家海洋环境监测中心，辽宁 大连 116023； 3．宝生物工程(大连)有限公司，辽宁 大连 116600 摘要：根据已知杂色沙蚕 (Nereisdiversicolor)金属结合蛋白II(MPII)部分基因序列设计引物，应用RACE技术从双 齿围沙蚕 (Perinereisaibuhitensis)中克隆得到 ]／eDNA序列全长为904bp，其中，开放阅读框为357bp，编码 119 个氨基酸。Blast比对结果显示，由双齿围沙蚕MP]／eDNA序列推导的氨基酸序列与多毛类Periserrulaleucophryna 蚯蚓血红蛋 白(Hr)、杂色沙蚕 (Nereis vP fc0for)蚯蚓肌血红蛋 白(MHr)及星虫类 ThemistezostericolaHr氨基酸序 列的同源性分别为 81．51％、77．12％和 61．02％，由此推断该 cDNA序列可能属于血红蛋 白家族 。应用Rea1．timePCR 方法，分别研究了沙蚕暴露于Cd 质量浓度为40mg／L的环境 中 l2、24、48和 72h后MP 基因表达水平的变化， 以及 3种质量浓度 5、10和 20mg／L Cd2暴露 15d后 MP 基因的表达水平 。实验结果表明：(1)沙蚕暴露于 40 mg／LCd 72h后，MP／／mRNA表达量显著增加，为空 白对照组的 12．6倍，表现 出极显著差异(尸l0．01)；(2)不同质量 浓度 cd诱导 15d后，各组 J=l ]／mRNA表达量均呈显著升高( 0．05)，达到空白对照组的4．8倍以上，且随Cd2 浓度增大，MP]／mRNA表达量增加。据此认为，MPII对 cd2+的应激调控发生于转录水平。本研究为海洋沉积环境 早期污染 的生态风险预测提供了分子生物学依据。 关键词：双齿围沙蚕；MP．／／eDNA；RACE；Cd ；real—timePCR 中图分类号：Q78；$917 文献标志~i-q：A 文章编号：1005-8737-(2011)05—0983-09 多毛类 (Polychaete)作为海洋底栖动物优势类 100～3000Ixg／g和 0．2～9．3Ixg／g，体 内蓄积量亦 群，具有特殊的生态学特性，一方面，其做为重 可分别达到 130～350 g／g和 0．08～3．6lag／g2【J。 要的饵料生物，是海洋生态系统能量流动与物质 已有许多资料证实，几乎所有脊椎动物和大多数 循环的关键环节…；另一方面，由于其具有体型 无脊椎动物，经重金属诱导后均能合成大量金属 大、生命周期长、行动缓慢 、分布广泛、对重金 硫蛋 白，参与细胞 内金属水平 的稳态调节、重金 属等持久性污染物耐受和富集能力较强[2 等特 属解毒以及清除 自由基等生物学功能。多毛类杂 征，一直被作为海洋沉积环境污染评价的指示生 色沙蚕暴露于镉后可形成金属结合蛋 白，从氨基酸 物和毒理研究模型动物。例如，Bryan等l5]发现杂 组成可认为其是类似于血红蛋 白(hemerythrin， 色沙蚕 (Nereisdiversicolor)暴露于 Cd 中 192h 或肌红蛋 白(myohemerythrin，Mhr)家族 的呼吸蛋 LC50达到 100mg／L，远超过一般海洋无脊椎动物 白，称为MPII，主要承担长期慢性重金属暴露条 0．1～10mg／L的耐受范围l。有研究表 明，在沉积 件下的解毒作用 。MPII不仅能够与镉相结合，而 环境 中，杂色沙蚕对锌和镉 的耐受值分别可达到 且还具有与锌和铜结合的能力L7；同时具有 明显 收稿 日期：2011一OI_05；修订 日期：201l—O5—03． 基金项 目：