水牛催乳素受体基因克隆及序列分析.pdfVIP

瓴}72惩4期 J 急r盔 gAg． Bi。 i。 20D08ec年．。12200月8 文章编号 ：1008—3464 (2008)04—0320—05 水牛催乳素受体基因克隆及序列分析 朱佳杰，何荆洲，王新平，蒋钦杨，冯雪萍，郭亚芬，兰干球，韦英明，蒋和生 (广西大学 动物科学技术学院，广西 南宁 530005) 摘要：扩增出广西本地沼泽型水牛 (Bubalusbubalis)催乳素受体 (PRLR)基因部分保守序列，用于 下一步实验检测体外培养的水牛乳腺上皮细胞中催乳素受体基因的表达水平。根据 已报道的奶牛催乳素受 体基 因cDNA序列的保守区，设计一对特异性引物 。提取广西本地水牛的乳腺组织总 RNA，并 以其为模 板，以下游特异性引物为反转录引物，在反转录酶 (AMV)作用下合成 cDNA 用 Ex—Taq酶进行PCR扩 增，得到催乳素受体基因的保守序列，长度为 571bp。该扩增产物经纯化后 ，连接到 pMD18一T载体上扩 增 。经序列分析结果表 明：序列较保守，与 GenBank上发表 的奶牛催乳素受体基因的同源性达到 98．9Vo， 与绵羊的同源性达到 96．5 ，与猪、小 鼠、人的同源性分别为 86．5 、78．9 、77．1 。催乳素受体基 因 与奶牛相 比，共有 6个碱基发生 了突变 ，其 中1个为 同义突变 ，其他 5个均为错义突变 ，形成 4个氨基酸 发生变异 。 关键词 ：水牛；催乳索；催乳素受体 中图分类号 ：Q78l；$823．83 文献标识码 ：A Cloningandsequenceanalysisofswamp buffaloprolactin receptorpartialcDNA ZHUJia—jie，HEJing—zhou，WANGXin—ping，JINGQin—yang，FENG Xue—ping， GUO Ya-fen，LAN Gan—qiu，WEIYing—ming，JIANG He—sheng (CollegeofAnimalScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China) Abstract：TotalmRNA isolated from themammarygland tissueofswamp buffalowasusedas templatestosynthesizecDNA byreversetranscription polymerase．Thepartialsequenceofprolactin receptorcDNA with length of571bpwasobtainedbyPCR．Bycomparingwith publishedprolactin receptorgenesequencewith BasicLoca1AlignmentSearchTool (BLAST)，thesequenceshowed highidentitywithcattleprolactinreceptor (PRLR)gene．Themultiplesequencehomologyofbuffalo tocattlewas98．99，6，tosheep96．5 ，topig86．596／，tomice78．99／6，tohuman77．196／．There werefournucleotidesmutationsoccurred in the signing peptideofPRLR，and onewasnonsense mutation．Theseprovedthatthesequenceisswampbuffaloprolactinreceptorgene． Keywords：buffalo；prolactin~prolactinreceptor (PRLR) 催乳素 (prolactin，PRL)又称促乳素或生乳素 ，是繁殖成功所必需的垂体前叶肽类激素 。它 主要起调节乳腺发育和泌乳、性腺发育、机体免疫等功能，参与应激反应并且对体细胞的增殖和分裂 收稿 日期 2007—1