可溶性MHC-肽四聚体技术及其应用进展.pdf

维普资讯 《现代免疫学~2007年第27卷第 1期 可溶性 MHC一肽四聚体技术及其应用进展 李慧忠 综述 畅继武 审阅 (天津市泌尿外科研 究所肿瘤免疫室 ，天津 300211) 摘要：抗原特异性细胞毒 T淋 巴 J~(cytotoxicT lymphocytes，CTL)~E控制病毒感染和肿瘤免疫治疗 中具有重要作用。而 研究、制备 由主要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex，MHC)I类分子的a链和 pz微球蛋 白、抗原肽 以及 有荧光染料标记 的连接蛋 白组成的四聚体 ，能够为鉴定特异性 CTL及研究细胞免疫机制提供简便、有效途径 ，同时也为 有关疾病的细胞免疫治疗提供新的方法 。 关键词 ：细胞毒 T淋巴细胞 ；流式细胞仪 ； 四聚体 中图分类号 ：R446．63 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001—2478(2007)01—0085—04 CTL通过识别细胞表面与MHCI类分子结合 MHC一肽四聚体技术 。该技术利用生物素一亲和素 的抗原肽而杀伤靶细胞，是机体抗肿瘤、抗移植物 结合的原理 ，在体外将 MHC分子及其所提呈的抗 及有效控制各种感染的重要免疫防御效应细胞 。抗 原肽组装成 MHC一抗 原肽 四聚复合物 (如 图 1所 原特异性 CTL的鉴定是研究 CTL疫苗免疫效果的 示)。该复合物相当于 TCR识别 的配体 ，能够被 基础 。传统的鉴定方法费时、费力且敏感性较低 。 特异性 T细胞识别 ，并且借助流式细胞仪可 以将 自从 Altman等于 1996年建立可溶性 MHC_肽四 结合有 MHC一抗原肽 四聚体 的T细胞克隆检测并 聚体技术 (MHC—peptidetetramer)以来 ，由于该技 分离出来。 术的特异性和高效性 ，目前 已被广泛应用于抗原特 2 可溶性 MHC．肽 四聚体 的技术改进 异性 CTL的定性和定量分析，成为研究细胞免疫 的强有力工具。文章就此内容作一综述。 四聚体的早期构建是将生物素连接在 MHCI 类分子重链的羧基端 ，由于 MHC分子的多态性 ， 1 可溶性 MHC．肽 四聚体技术 致使该项工作 比较繁杂 。Alexis等 改变 以前在 T细胞在机体特异性免疫应答中发挥举足轻重 MHC分子的羧基端加上 15个氨基酸的策 略，而 的作用 ，其特异性识别的靶分子不是抗原分子上的 只加一个半胱氨酸。由于只引入 了一个氨基酸对 天然表位 ，而是由MHC分子提呈 的抗原肽 (T细 MHC分子的结构影响较小 ，且这一未配对的半胱 胞表位)，由于T细胞双识别 的特点 ，决定 了对其 氨酸能够高效地利用化学方法进行标记 ，制备过程 特异性的研究必须考虑抗原肽的性质和提呈抗原肽 简单而有 效。近来有学者对 四聚体技术进行 了优 的MHC分子型别。80年代 以来 已有许 多学者应 化 ：将生物素化的MHC一肽复合物单体被覆在亲和 用可溶性 MHCI类分子来研究 T淋 巴细胞反应 ， 素包被的磁珠上 ，产生 MHC一肽多聚体 。通过这种 但结果并不理想 。其原因是单价 MHC_肽复合物与 四聚体磁珠祛除一些对细胞有毒的因子，如细菌类 TCR结合的亲和力较低 (≈10一tlmol／L)，且解离 毒素、蛋白酶抑制剂 、叠氮钠 ，从而对细胞进行功 快 ，形成的复合物半衰期不足 1min。有研究发现 能研究 (图 1)_2]。 四价的MHC．肽复合物在亲和力和生物效应方面都 最近 ，Bras—Goncalves等 又创建了一种新 的 是最佳 的。Altman等基于这一特点发 明了可溶性 构建四聚体的方法 ，可以不