注重“细节”保证“细胞培养技术”实验教学的顺利进行.pdfVIP

中国西部科技 2013年04月第 12卷第04期总第285期 67 注重 “细节保证 “细胞培养技术实验教学的顺利进行 李卫红 张海燕舟 王学江 (首都医科大学基础医学院，北京 100069) 摘 要：细胞培养技术是医学院校研究生从事课题研究必备的一项基本技能，因此也是研究生的必修课程之一。为使学生在 较短的时间内掌握有关细胞培养的基本技术，实验课的实施尤为关键，而注重实验课程中的每一 “细节”，则是这门课程的精 髓和灵魂 。 关键词：细胞培养；实验教学；细节 DOI：10．3969／j．issn．1671—6396．2013．04．033 细胞培养技术是生命科学研究中一项不可缺少的基本技 后，分发分装好的小包装液体：基础培养基、胎牛血清、青 术，也是从事生命科学研究的研究生必备的基本实验技能 l【。】。 霉素、链霉素、胰蛋 白酶、PBS各一份。 “实用动物细胞培养技术”作为一门课程，已在首都医科大 1．2学生进入实验室前的准备 学开设将近3O年。随着生命科学的不断发展，该课程 内容也 学生进入细胞培养室操作前，需穿着干净整洁的白大 不断调整，增加最新的进展，但它的初衷与精髓不变，那就 衣、套鞋套、用肥皂洗手。携带 2％新沽尔灭浸泡的纱布进 是 “实用与实践”4【】。“实用”是指在理论课教学中不仅讲解基 入无菌操作间，用于随时清洁台面，以保持台面整洁、卫生。 本的技术方法，同时还不断增加最新的关于细胞培养技术的 2 常用液体的配制 介绍，如 “干细胞研究进展”；“实践”是在实验教学中结合理 细胞培养液是维持细胞生存、生长所需的基本溶液。根 论课教学内容，既安排学生完成最基本的培养技术方法，同 据其用途不同包括：平衡盐溶液、合成培养液、无血清培养 时还不断增加综合性、创新性实验，如 “小鼠骨髓干细胞的 基等。尽管这些液体己完全商品化，但设计这一实验的 目的 分离”，“MTT法测定细胞增殖能力”，使学生在学习这 门课 是为了使学生详细了解细胞生长所需的营养成分、生理环境 程期间有大量的时问自己动手完成各种实验。总结多年的教 (如渗透压、pH 值等)，并且能够掌握细胞培养所需液体 学实践经验，我们认识到：合理安排，注重实验教学中的每 的配制技术及无菌过滤过程。 一 环节，而每一 “细节”则是保证研究生 “实用动物细胞培养 2．1课前准备 技术”课程实验课教学顺利进行的关键。本文以几个基本实 在实验课前将实验所需的容器仔细清洗并经过干热灭 验为例，谈谈在实验教学实施过程中的“细节”。 菌；准备各种分析纯的试剂、纯水、天平、称量纸、药勺等； 1 实验课准备的基本 内容 常用 的几种过滤器 ；各种容量的容量瓶、烧杯 、玻璃棒 以及 1．1实验材料的准备 分装液体用的灭菌过的血清瓶。 在实验课前根据不同实验内容、学生分组 (每2名学生 2．2实验课液体配制 为一组)情况准备实验试剂、手术器械、耗材等，以此保证 配制的液体包括：DMEM 培养基、水解乳 白蛋 白、平 学生在细胞培养实验课中所需的所有试剂均为无菌。具体 内 衡盐溶液如含钙镁的 Hank’s液、无钙镁 PBS、0．1％的醋酸 容包括：(1)原代培养用的手术器械，如外科剪、外科镊一 溶液。 组，眼科剪、眼科镊一组，经医用酒精擦洗，分别用牛皮纸 2．3实验课环节 包装，高压灭菌备用。(2)移液所用玻璃吸管按照直管 1支、 所配液体全部是后面实验所需液体。在配制 10X含钙 弯管 1支、lmL管一支、5mL管 1支为一套，装在不锈钢 镁的 Hank’S液时，指导老师随时强调在溶解各种成分时要 桶中，放鼓风干燥箱中 180℃干烤灭菌2h备用。(3)普通试 严格按照配方顺序；一定要在完全溶解后添加，并且充分混