沉默FNBPl基因对人HL-7702细胞体外增殖及迁移能力的影响.pdfVIP

第 20卷第4期 激 光 生 物 学 报 V01．20NO．4 2011年 8月 ACTA LASER BIOLOGY SINICA Aug．2011 doi：10．3969／j．issn．1007~·7146．2011．04．012 沉默 肌 25}尸1基 因对人 HL一7702细胞 体外增殖及迁移能力的影响 张乾英 ，王蕴红 ，朱重阳，张 军 (1．重庆医科大学 a．分子医学及肿瘤学研究中心；b．细胞生物学及遗传学教研室，重庆 400016) 摘 要 ：为了研究沉默FNBP1(formin—bindingprotein1)基因对细胞体外增殖以及对细胞迁移能力的影响，设计 并构建了3个靶向FNBP1siRNA干扰载体 (Si一1，Si-2，Si一3)，经酶切和DNA测序鉴定后转染人正常的肝细胞 HL~702。RT．PCR和Westernblot检测瞬时转染细胞 中FNBPI基因的干扰效率，筛选出特异高效的RNAi靶 点。并用 G418筛选稳定表达了RNAi的细胞株，用XTT法检测细胞体外增殖率，划痕法检测细胞的迁移能力。 结果显示 ：酶切和测序结果证明干扰质粒构建正确；转染特异性的干扰质粒(Si一1、Si-2、Si一3)细胞的FNBP1基因 表达量与对照组相 比均有所降低，在蛋 白质水平表达也明显受到抑制，且重组干扰质粒 Si一2的干扰效应较强。 xTT检测结果表明，构建的沉默FNBP1重组质粒 Si-2能显著抑制HL一7702细胞的体外增殖能力，但并不直接影 响HL-7702细胞的迁移能力。 关键词 ：FNBP1；RNA干扰；HL．7702细胞 中图分类号 ：Q245；Q26 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007．7146(2011)04-0490-06 EffectsofDown-regulatingFNBP1GeneonCellProliferationand M etastasisAbilityinHL-7702Cells ZHANGQianying，WANGYunhong，ZHUChongyang，ZHANGJun (ChongqingMedicalUniversity a．InstituteofMolecularMedicineandOncology； b．DepartmentofCellBiologyandGenetics，Chongqing400016，China) Abstract：ToinvestigatetheeffectofsilencingFNBP1(formin—bindingprotein1)geneontheproliferationandmetas— tasisabilityofHL-7702cells，Threesma]linterferenceexpressionvectors(Si一1、Si-2、Si一3)specifictoFⅣ8P1mRNA weredesignedandconstructed．thenweretransfectedintotheHL-7702cellsafteridentifiedbyrestrictionanalysisand DNA sequencing．AnalysisofefficiencyofFNBP1siRNAwasdetectedbyRT—PCRandWestern—blottochoosethehigh— estinhibitorytargetofFNBP1amongthethreevectors．ThecelllinewithstableexpressionofsiRNAofFNBP、wasse— leetedbyG418medium for15days．AfterFNBP、knockdown．theproliferationofHL一7702cellswasmeasuredbythe Xrrrassaya