牛睾丸中透明质酸酶提取工艺研究.pdfVIP

第40卷第8期 应 用 化 工 Vo1．40No．8 2011年 8月 AppliedChemicalIndustry Aug．2011 牛睾丸中透明质酸酶提取工艺研究 李丹，郭育涛，杨永利，白小花 (西安建筑科技大学 理学院，陕西 西安 710055) 摘 要：以牛睾丸为原材料 ，采用过滤离心相结合的方法提取透明质酸酶。研究了提取剂、静置时间、分离方式、盐 析试剂及盐析试剂加入量对透明质酸酶活力的影响。结果表明，较佳提取条件为：以pH3．5的盐溶液(由 0．1mol／L~酸+1mmoL／L盐酸 +0．1mol／LNaC1配成)为提取剂，提取液0℃静置8h。提取液过滤后30oor／rain 离心分离，加入240g／L硫酸铵作为盐析试剂，此时酶活力较高，为277．5U／mL，比活为 12．4U／p,g，回收率为 3．87％ 。 关键词 ：透明质酸酶 ；酶活力；提取 中图分类号：Q556 ．2；Q556 ．9 文献标识码：A 文章编号：1671—3206(2011)08—1427—03 Research on hyaluronidaseextractionfrom bovinetesticular L／Dan，GUO Yu—tao，YANG l，_0 一li，BAIXiao—hua (CollegeofScience，Xi’anUniversityofArchitectureandTechnology，Xi’all710055，China) Abstract：Themethodoffiltration—centrifugaltoextracthyaluronidasefrombovinetesticularwasstudied． ，Iheeffectsofexrtactant，holdingtime，separationmethod，saltingreagentandthebestdosageofsaltingre· agentonactivityofhyaluronidasewerestudied．Theresultsshowedthebestreactionconditions：pHvalue ofsaltsolution3．5(O．1mol／Laceticacid+lmmol／LHCI+0．1mol／LNaC1)asthebestselectionof extractionsolvent．Afterstanding8hat0oC，extractionsolventwasseparatedwithhtemehtodoffilrtation andcentrifugalat3000 r／min．Thehighestenzymeactivitywas277．5 U／mL．specificactivitywas 12．4U／ gandtheyieldwas3．87％ withammonium sulfate240g／L assaltingreagent． Keywords：hyaluronidase；activity；extraction 透明质酸酶(HAase)是水解透明质酸使其分子 1 实验部分 量降低的一种蛋 白酶…。其用途极其广泛，己广泛 1．1 试剂与仪器 应用于肿瘤检测_2J、眼科手术 及轻缺血损伤，缩 透明质酸(北京康倍斯科技有限公司)；新鲜牛 小心肌梗死范围 等领域。 睾丸；3，5二硝基水杨酸、氢氧化钠、冰醋酸、氯化 近 10年来，对透明质酸酶的研究主要集中在分 钠、甘油均为分析纯。 离、纯化和应用的研究，而分离和纯化一直是研究的 NE-300型紫外可见分光光度仪；LGR10-4．2冷 核心问题 J。尽管透明质酸酶在60多年前就被研 冻离心机；D6F250