胸膜肺炎放线杆菌ApxIA N端基因的克隆与原核表达.pdfVIP

安徽农业科学。JournalofAnhuiAgri．Sci，2009，37(6J：2419—2421 责任编辑 常俊香 责任校对 傅真治 胸膜肺炎放线杆菌 ApxIAN端基因的克隆与原核表达 吴笳笛，苏禹刚，费东亮 (辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁锦州121ooo) 摘要 [目的]为猪接触传染性胸膜肺炎的诊断和基因工程疫苗的研制提供理论依据。[方法]以胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清10型茵 株为材料，采用PCR技术对其ApxlA的N端基因进行扩增，将扩增产物转入克隆载体和表达载体中进行克隆和表达，用重组表达质粒 转化大肠杆菌BI_21(DE3)，利用免疫印迹分析鉴定ApxlAN端基因表达产物的免疫活性。[结果]ApxlAN端基因PCR扩增产物与标 准l0型ApxlAgene(D16582)的同源性为99．7％。NcoI和HindllI双酶切鉴定结果表明，目的基因已成功转入原核表达载体pET-32a中。 含重组质粒的大肠杆菌BL21经IPTG诱导后表达 了相对分子量为779kDa的 目的蛋白，该蛋白分子量与标准ApxlA蛋白(Marker)相同。 [结论]SDSPAGE电泳和免疫印迹检测结果表明，ApxlAN端基因在表达载体中得到高效表达，且表达产物具有免疫活性。 关键词 胸膜肺炎放线杆菌；毒素 IA；克隆；检测 中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 o517—6611(2009)06—02419—03 CloningandProkaryoticExpression ofApxIA GeneofActinobacilluspieuropneumoniae WUJia-dietal (AnimalHusbandryandVeterinaryMedicineCollege，LiaoningMedicalUniversity，Jinzhou，Liaoning121000) Abstract l0bjectivelThestudywastoprovidethe．theoreticalbasisfordiagnosisonpigcontactinfectiouspleuropneumoniaeanddevelopment ofgeneticengineeringvaccine．[Method]With10typestrainofActinobacilluspleuropneumoniae(APP)serunlasthematerial，PCRtechnique wastakentoamplifyN—endgeneofApxIA．andtheamplifiedproductswas~ansferredintocloningandexpressionvectortocloneandexpress AndtherecombinantexpressionplasmidwastakentotransfoITnEscherichiacolBI21(DE3)，theimmuneactivityofexpressionproductsof ApxIAgenewasanalyzedandidentifiedbywesternblot．[Result]111ehomologyofPCRamplifiedproductsofApxlAgeneandstandard10tape ApxlAgene(D16582)was99．7％．TheidentificationresultsofNcoIandHindIlIdoubleenzymedigestionindicatedthatthetargetgenewas successfullytransformedintoprokaryoticexpressionvectorpET-32a．AfterinductionbyI G．theEschenchiacolB 1includingrecombinant plasmidexpressedtargetproteinwhichrelativemolecularweightwas779kDa，andthemolecularweightoftheproteinwasthesamewiththat ofstanderApxIAprotein(Marker)．fConclusionlrrheresultofSDS—PAGEelectrophoresisandwestern blotindicatedthattheN．endgeneof ApxlA hadhighlevelexpressioninexp