抗猪甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备与特性分析.pdfVIP

畜牧兽医学报 2011，42(5)：71卜716 AetaVeterinariaetZootechnicaSinica 抗猪 甲型 H1N1流感病毒血凝素蛋 白单克隆 抗体 的制备与特性分析 张 健 ，陈 艳 ，乔传玲 ，杨焕 良，唐 续 ，辛晓光 ，陈化兰 (中国农业科学院哈尔滨兽 医研究所 兽 医生物技术 国家重点实验室 农业部动物流感 重 点开放实验室 ，哈尔滨 150001) 摘 要 ：本研究 旨在制备猪 甲型 H1N1流感病毒血凝素 (HA)蛋 白的特异性单克隆抗体 。采用 RTPCR方法扩增 猪 甲型 H1Nl流感病毒 的 HA基 因，将其克 隆至真核表达载体 pCAGGS上 ，获得重组质粒 pCAGGS—HA，转染 293T细胞 ，通过 间接 免疫荧 光 (IFA)检测 表 明 HA 蛋 白在 293T 细胞 中得 到 表达 。将 pCAGGSHA 以 i00 g ·只 剂量免疫 5周龄 BAIB／c小 鼠，获得 4株稳定分泌抗 HA蛋 白单克 隆抗体 (MAb)的杂交瘤细胞株 ，分 别命名为 11G7、3C10、3G3和 2BI1。其 中 11G7诱 导小 鼠产生的腹水 HI效价为 141og2，中和效价 为 1：8192，H1 试验结果进一步表 明 11G7只与甲型 HlN1流感病毒发生反应 ，而小与其他 H1N1、H1N2、H3N2、H5NI及 H9N2 亚型流感病毒反应 。该 MAb的制备将为建立猪 甲型 H1N1流感病毒与传统亚型 SIV的鉴别诊断方法奠定基础 。 关键词 ：甲型 H1N1猪流感病毒 ；HA；MAb 中图分类号 ：$852．659．5 文献标识码 ：A 文章编号 2011)O5071106 Preparation andCharacterizationofM onoclonalAntibodyAgainstHemagglutinin Proteinof2009StrainofH1N1SwineInfluenzaVirus ZHANGJian，CHEN Yan，QIAO Chuanling，YANG Huan—liang，TANG Xu， XIN Xiaoguang，CHEN Hua—lan (AnimaZInfluenzaLaboratoryoftheMinistryofAgriculture，StateKeyLaboratoryofVeterinary Biotec’hnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAc’ademyofAgricultural Sciences，H “而 15000l。China) Abstract：Thisexperimentwasconductedtopreparemonoclonalantibodiesspecifictothehemag— glutininproteinofH1Nlswineinfluenzavirus(SIV)，A／Swine／Heitongjiang／44／2009．Hemag glutinin (HA)geneoftheSIV wasamplifiedbyRT PCR ，andthentheHA genewassubcloned intotheeukaryoticexpressvectorpCAGGS．Therecombinantplasm id wasnam ed aspCAGGS— HA ．ExpressionofHA proteinin293T cellwasconfirmedbyindirectimmunofluorescenceassay (IFA)．FiveweeksoldBALB／cmicewereimmunizedwith10O “gpCAGGS—HA plasmideach time，and4