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第 28卷第2期 河 北 农 业 大 学 学 报 Vo1．28No．2
2005年 3月 JOURNALOFAGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI Mar．2005
文章编号 ：1000—1573(2005)02 0009—06
柿 AFLP银染技术体系的建立
王文江。’ 张桂霞 ’ 崔惠英 ， 张志华
(1．河北农业大学 山区研究所，河北 保定 071001；2．天津农学院 园艺系 ，天津 300384；
3．河北省林业技术推广总站 ，河北 石家庄 050081)
摘要：通过对各主要影响因素的研究，建立了适于柿AFLP分析的银染技术体系：酶切体系 20 L总体积中含纯
化后的DNA450ng，EcoR I和 MseI各 3U，37℃酶切 4h；酶切完成后加入连接液 ，37℃连接 10h(或过夜)，然
后 65℃变性 10min；连接产物稀释5倍用于预扩增，预扩增体系中EcoRI和MseI引物均不含选择性碱基；预扩
增产物稀释 5倍用于选择性扩增。选择性扩增体系中EcoRI和MseI引物均含 3个选择性碱基，选择性扩增完
成后，加入 10 LLoadingbuffer，95℃变性 10min，立即冰浴；取 6．5 L变性后的选择性扩增产物在 6％变性聚
丙烯酰胺凝胶上电泳，电泳完毕后。对胶板进行固定、脱色、水洗、银染、冲洗、显影、定影及干燥等银染程序。
关 键 词 ：柿 ；AFLP；银染技术体系
中图分类号 ：S665．2 文献标识码 ：A
Theestablishm entofAFLP silver—。—staining
techniquesystem forpersimmon
WANGWen—jiang ，ZHANGGui—xia，OUIHui—ying，ZHANGZhi—hua
(1．MountainousAreasResearchInstituteofHebeiProvince，AgriculturalUniversityofHebei，Baoding071001．China；
2．DepartmentofHorticulture。AgculturalCollegeofTianjin，Fianjin300384．China；
3．StationofForest—technologyExtensionofHebeiProvince，Shijiazhuang050081，China)
Abstract：Aftersystematicalstudyon themain factorsinvolved，anAFLP silver—staining tech—
niquesystem fittingforpersimmongenomicDNA analysiswasestablished．Restrictiondigestionof
genomicDNA wasperformedbyusingtworestrictionenzymes，around450ngDNA digestedwith
3unitsofEcoR IandM seIenzmy esrespectivelyinareactionvolumeof20 ／,L andincubatedat
，
37℃ fOr4h．Double—
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