橄榄油乳化法测定脂肪酶活性的优化研究.pdfVIP

品工素 ●工艺技术 橄榄油乳化法测定脂肪酶活性的优化研究 滕宏飞，王丹静，徐青，辛建美，罗红宇 浙江海洋学院食 品与药学学院 (舟山 316004) 摘 要 以猪胰脂肪酶为例，针对传统橄榄油乳化法存在准确度较低、重现性不佳等问题，对底物 浓度及用量、均质时问、缓冲液添加量、反应体系温度、反应环境等反应条件进行了优化研究：以 20％橄榄油乳化液5mL代替25％橄榄油乳化液4mL，以3mL磷酸盐缓冲液代替5mL磷酸盐缓冲液， 将均质处理的速度与时间由高速 (10000r／min)、6min降低为5000r／min、2min，将反应体系温度 由4O℃降低为35℃，改变静止的反应环境为在100r／min下振荡反应，选择在空白组反应体系中加 入lmL0．025mol／LpH7．5磷酸缓冲液代替1mL酶液。优化后的条件下测得的脂肪酶活力较优化前提 高了35％以上，平行测定的RSD值为5．5％，方法的精密度较高。 关键词 橄榄油；乳化法；脂肪酶；优化 OptimizationStudyof0liveo¨EmulsificationMethodDeterminingLipaseActivity TengHong-fei，WangDan-jing，XuQing，XinJian—mei，LuoHong-yu AcademyOfFoodandPharmacy,Zhejiang0ceanUniversity(Zhoushan316004) Abstract Takingporcinepancreaslipaseforexample．asthetraditionaloliveoi1emulsificationmethods iSwithproblemsoflOW accuracyandpoorreproducibility,thereactionconditionsincludingtl1esubstrate concentrationandamount，thehomogenizationtime，theamountofbufferliquidadded，reactiontemperature andreactionenvironmentwereoptimized．The4mL．25％oliveoilemulsioninsteadof5mL。20％ oliveoil emulsionwasusedandthe3mLphosphatebufferinsteadof5mLphosphatebufferwasused．Meanwhile． thehomogenizationspeedandtimefromhigh．speedf10000r／min)，6minreducedto5000r／rain，2min； thereactiontemperaturedecreasedfrom 40℃ to35℃ ：thestaticreactionenvironmentwaschangedto100 r／minoscillation；1mL．0．025mol／LphOSphatebu船 atpH7．5wasaddedinhtecontro1groupjnsteadof1mL enzymesolution．Underoptimum conditions．1ipaseactivityiSincreasedbv35％ thantheactivityofbefore optimizationandparalle1determinationoftheRSD is5．5％．ThemethodiSofhighprecision． Keywords oliveoil；emulsificationmethod；1ipase；Optimization 橄榄油乳化法是测定脂肪酶活性的常用方法，其 厂；SHY-3水浴恒温振荡器：江苏省金坛市金城 国胜 测定的原理是天然油脂被水解产生的游离脂肪酸可以 实验仪器厂。 被氢氧化钠中和，根据消耗氢氧化钠的量问接测定脂