12个蚕豆品种RAPD指纹图谱的构建.pdfVIP

- - — — 48--—— 江苏农业科学 2011年第39卷第3期 侯万伟，刘玉皎，李 萍，等．12个蚕豆品种RAPD指纹图谱的构建[J]．江苏农业科学，2011，39(3)：48—50 12个蚕豆品种 RAPD指纹图谱的构建 侯万伟，刘玉皎，李 萍，张小田 (青海省农林科学院，青海西宁810016) 摘要：对 12个蚕豆品种基因组DNA进行扩增，构建蚕豆不同品种的指纹图谱，利用RAPD标记技术。研究结果： 42个不同的随机引物中有 14个扩增出多态性 DNA片段 ，其中1个引物 ($31一CAATCGCCGT)可使每一品种具有其 自身的特征谱带。研究结果表明，RAPD技术可从 DNA水平上鉴别蚕豆品种 的分子差异，用以鉴定品种纯度是可 行的。 关键词：RAPD；蚕豆；指纹图谱 中图分类号：$643．601 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2011)03—0048—02 、 蚕豆是豆科巢菜属 1年生或越年生草本，籽粒蛋白质含 DNA聚合酶(MBI)1U，Mg“2．5mmol／L，10×反应缓冲液 量约25％～28％，含8种必需氨基酸，特别是赖氨酸含量丰 2x／L。扩增程序为：94qc预变性 5min，94oC变性30S，38℃ 富。还含有大量钙、钾、镁等矿质元素。蚕豆种质资源丰富， 复性 1min，72℃延伸 1min，35个循环，最后 72℃延伸 Link等应用分子标记技术对不同地区蚕豆种质资源进行了 10rain，4℃保存。扩增产物用6％的聚丙烯酰胺凝胶进行电 遗传多样性研究 。国内主要依据形态学性状对蚕豆种质 泳检测 ，电泳缓冲液为 1×TBE，银染凝胶。 进行了分类和研究 ，但尚未见从分子水平上进行的研究 根据电泳结果，记录清晰可重复的条带。将每一引物扩 报道。 增每一样品产生的每条带作为性状看待，记为 1个位点，当在 RAPD 标记操作具有简单、快速，成本较低，对 DNA 某一样品中有该带出现时编码为 “+”，否则为 “一”，以此为 的纯度要求不高等特点，在种属特异性鉴定等方面被广泛地 据，获得各品种的DNA指纹图谱。 应用 。本试验采用RAPD标记技术对 12个蚕豆品种进 2 结果与分析 行基因组指纹图谱分析，以期探讨蚕豆品种之问的差异，为进 一 步选择强优势组合的亲本选配，蚕豆品种资源的鉴定和品 2．1 多态性引物的筛选 种纯度的检测提供科学依据。 本试验共用了42条随机引物，其中14条引物 出现不同 数量的多态性条带，引物的多态性比例为33．3％。应用非变 1 材料与方法 性聚丙烯酰胺凝胶进行RAPD扩增产物的检测可以有效地增 1．1 供试材料 加分辨率，提高引物的多态性，更好地鉴别品种在分子水平上 青海9号、青海 11号 、青海 l2号、马牙、陵西一寸、法 D、 的差异 。 河内、透心绿 、双…0’、湟饲、130和尕大豆。 表 l 不同引物扩增蚕豆品种DNA片段数 1．2 方 法 引物 扩增带 多态性 引物 扩增带 多态性 1．2．1 DNA提取及检测 取蚕豆幼嫩叶片约 1g，加液氮研 序列 数(条)数(条) 序列 数(条)数(条) 磨至粉末状，加入装有0．8mLDNA提取缓冲液[100mmol／L AGCACI’I℃GC 6 3 GTAGGC(CG 9 5 Tris(pH 值 8．0)，150