小鼠造血干细胞的分离、培养及重组慢病毒.pdfVIP

第 44 卷　第 4 期 ( ) Vol. 44 No. 4 复 旦 学 报 自然科学版 2005 年 8 月 Journal of Fudan Universit y (Natural Science) Aug. 2005 　　文章编号 : (2005) 小鼠造血干细胞的分离、培养及重组慢病毒 载体介导的离体 hF Ⅸ基因表达 姚恒美 ,陈浩明 ,黄　璐 ,沈　琦 ,贾韦国 ,薛京伦 (复旦大学 生命科学学院 遗传学研究所 ,遗传工程国家重点实验室 ,上海 　200433) 摘 　要 : 造血干细胞是基因治疗理想的靶细胞之一 ,尤其适用于遗传性血液病. 而重组慢病毒载体能高效感染 ( ) 造血干细胞 ,成为造血干细胞途径基因治疗的理想载体. 从小鼠骨髓细胞中分离出单个核细胞 MNCs 进行体外 - + ( ) 悬浮培养 ,并用免疫磁珠法分离得到高纯度的小鼠 Lin CD117 造血干细胞 HSCs . 体外悬浮培养期间 ,添加细 胞因子的造血干细胞的细胞数和集落数逐渐增加 ,而未添加细胞因子的对照组的细胞数量无明显增加 ,细胞集 落递减. 用磷酸钙介导的共转染法制备了携带 F Ⅸ基因的 FUXW 重组慢病毒 ,用慢病毒载体分别感染从 ICR 小 鼠和C57 小鼠中分离得到的 MNCs ,7 d 后测得细胞上清中 hF Ⅸ的表达量分别为 41. 7 ±4. 2 和 34. 5 ±6. 6 ng/ mL ,而慢病毒感染 C57 小鼠造血干细胞 ,添加细胞因子组上清中 hF Ⅸ的表达量为 46. 6 ±5. 7 ng/ mL ,不添加 细胞因子组为 33. 3 ±4. 8 ng/ mL . 实验结果表明 , 重组 FUXW 慢病毒载体可有效感染小鼠单个核细胞和 Lin - CD117 + 造血干细胞 ,添加细胞因子可提高转移基因的表达量. 关键词 : 单个核细胞 ; Lin - CD117 + 造血干细胞 ; 重组慢病毒载体 ; 人凝血因子 Ⅸ 中图分类号: Q 786 　　　　　文献标识码 : A ( ) 　　造血干细胞 Hematopoietic stem cell ,HSC 具有自我更新和分化为血液及免疫系统中各种成熟细胞 的能力因而成为基因治疗理想的靶细胞1 ,2 . 同时造血干细胞是不均一的细胞群体 ,缺乏直接的形态学鉴 别特征 ,且在骨髓、脐带和外周血中的含量较低. 近年来分离到多种 HSC 及其他类型血细胞的表面特异性 抗原 ,使得 HSC 及其他特定种类细胞的鉴定、分离成为可能. CD117 (又称为 ckit 或干细胞因子受体 SCF R) 是小鼠主要的造血干细胞表面标志3 . 基于 HIV1 的慢病毒载体具有感染低分裂潜能细胞的特点 ,从 而取代传统的反转录病毒成为造血干细胞基因治疗载体研究中的热点. 慢病毒介导造血干细胞途径的基 4 β 5 因治疗在镰刀形细胞贫血 和 地中海贫血 等血液病中已获得相当进展 , 因此 ,本文在此基础上探索 ( ) 慢病毒在血友病 B 基因治疗中的可