酵母蔗糖酶的纯化及其化学修饰.pdfVIP

第29卷第 6期 食 品 与 生 物 技 术 学 报 Vo1．29 No．6 2010年 11月 JournalofFoodScienceandBiotechnology NOV． 2010 文章编号：1673—1689(2010)06—0901—04 酵母蔗糖酶的纯化及其化学修饰 赵 蕾， 任 明 (山东师范大学 生命科学学院，山东 济南 250014) 摘 要：采用细胞破碎 ，热变性除杂蛋白，有机溶剂沉淀，DEAE—SepharoseFastFlow柱层析等 方法从酵母 中纯化酵母蔗糖酶，用5种化学修饰剂 PMSF、SUAN、NBS、DTT、EDTA及几种金属 离子对其进行化学修饰 。结果表明：酶分子 中的丝氨酸残基和金属离子与酶活力无关，赖氨酸残 基和半胱氨酸残基对酶活力有一定贡献 ，但不位于酶的活性 中心；而色氨酸残基是酶活性 中心的 必需基 团。 关键词：酵母蔗糖酶；纯化；化学修饰 中图分类号：Q946．5 文献标识码 ：A PurificationandChemicalM odificationofYeastInvertase ZHAO Iei。 REN M ing (CollegeofIireScience，ShandongNormalUniversity，Jinan250014，China) Abstract：Inthisstudy，yeastinvertase(13一fructofuranosidehydrolase)wasextractedandpurified bycelldisruption，heatdenaturation，organicsolventprecipitationandDEAE-- SepharoseFast Flow chromatography．Fivechemicalmodificationagents(PM SF，DTT，SUAN，NBS，EDTA) andseveralothermetalionswereusedtodeterminetheaminoacidresiduesinvolvedintheactive siteofyeastinvertase．Theresultindicatedthatserineresiduesandmetalionswereinessentialto theinvertaseactivitywhilethe1ysineandcysteineresidueswereIinkedtotheenzymeactivity， whichwerenotin theactivesiteoftheenzyme．Thattheindolylringoftryptophan residues could bemodified byN ——bromosuccinimideand thesegroupscould beprotected by sucrose revealedthatthetryptophanresidueswerepresentattheinvertaseactivesite． Keywords：yeastinvertase，purification，chemicalmodification 酶蛋 白是极其复杂的生物大分子，执行着许多 使用价值 。 重要 的生物学功能，而蛋 白质 的化学修饰是研究蛋 蔗糖酶 (Sucrase，EC3．2．1．26)又称转化酶 白质结构与功能的重要方法，通过对蛋 白质侧链基 (Invertase)，可作用于B一1，2糖苷键 ，并将蔗糖水 团进行化学修饰 ，可进一步探明酶活性部位的结构 解为 I)I葡萄糖和 I)I果糖 。蔗糖酶广泛存在于动植 与功能的关系，从而扩大酶的应用范