gp120转基因小鼠制备及初步鉴定.pdfVIP

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2010往 12月 首 都 医 科 大 学 学 报 Dec.2010 第 3l卷 第 6期 JournalofCapitalMedicalUniversity Vol_31 No.6 [doi:10.3969/j.isSn.1006-7795.2010.06.002] ·HIV/AIDS基 础与 临床研 究进 展 ’ gpl20转基因小鼠制备及初步鉴定 张洪海 孙 玉 柳雅立 张 彤 吴 昊 陈德喜 (首都医科大学附属北京佑安医院性病艾滋病实验室) 【摘要】 目的 构建HIV一1B’亚型gpl20转基因载体,制备gpl20转基因小鼠。方法 扩增gpl20全长序列,根据读码框架定 向连接到pSEAP2.control外分泌性真核表达载体上,插入GFAP启动子,回收含启动子一gpl20-增强子的功能片段制备转基因小 鼠,PCR和RT.PCR验证基因整合与mRNA转录。结果 酶切鉴定与测序验证均证明构建了受GFAP启动子调控的gpl20转基 因载体,蛋白印迹分析显示其分泌性和组织特异性都很高;RT—PCR证实转基因小鼠存在gpl20mRNA转录。结论 成功构建了 gpl20转基因载体,并生产了Sunder小鼠。 【关键词】 人类免疫缺陷病毒;gpl20;痴呆;动物模型 【中图分类号】 Q789 PreparationandIdentification ofgpl20TransgenicM ice ZHANGHong—hai,SUN Yu,LIU Ya-li,ZHANG Tong,WU Hao,CHEN De—xi (STDAIDSLaboratory,BeijingYouanHospital,CapitalMedicalUniversity) A【BSTRACT】 Objective ToconstructHIV一1BsubtypegP120transgenicvectorandpreparegP120transgenicmice.Methods gpl20genewasamplified and clonedtopSEAP2一controlvectoraccordingtoreadingframe,then GFAP promoterwasinserted.The functionfragmentwithpromoter—gpl20 gene—enhancerwasdigestedandextractedtopreparetransgenicmice.Thegeneintegrationand mRNA transcriptionwasvalidatedbyPCR andRT—PCR.Results GFAPpromotercontrolledgpl20 transgenicvectorwassuccessfully consturctedandvalidatedbygenesequencing,Westernblottinganalysisshowedthatthesecretionandtissuespecificityofgpl20washigh enough;Theexistenceofgpl20mRNA transcriptionintransgenicmicewasconfirmedbyRT-PCR.Conclusion gpl20transgenicvector Was successfullyconsturctedandfoundermicewereproduced. 【KEYWORDS】 humanimmunodeficiencyviurs;gpl20;dementia;animalmodel 多数艾滋病患者的中枢神经系统都可感染HIV一1, 质粒(本实验室保存);感受态大肠杆菌JM109(全式 并可导致一系列认知与运动障碍等神经症状 J,虽然 金);Taq酶、TDNA连接酶 、DNAMarker、pMD18一T载 小胶质细胞和星形胶质细胞是HIV.1的靶细胞,神经 体、限制性内切酶XhoI、XbaI、Hind11I、EcoRI、NotI、 元不直接被感染,但其受累却最严重,显然,HIV的间接 SalI(Takara)。小量琼脂糖凝胶 回收试剂盒、DNA提 损伤机制发挥了重要作用,其中包括 HIV外膜蛋 白 取试剂盒、PCR产物回收试剂盒、小量质粒提取试剂 gpl

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