铁渗透反应格栅下游水化学环境变化对微生物群落分布的影响.pdfVIP

理论探新 一 铁渗透反应格栅下游水化学环境变化对微生物群落分布的影响 陈 亮 (中国地质大学(北京)水资源与环境工程北京市重点实验室 北京 100083) 中图分类号：X14 文献标识码：A 文章编号：1672—7894(2009)03-287-02 摘 要 文 中分别 以苯、甲苯、苯和 甲苯为碳源，直接采用地 通过微生物稀释平板培养方法，选用几种最广泛、最常见的培 下水和采用加入铁和三氯乙烯 (TCE)浸泡过的地下水进行微生物 养基 ：营养琼脂培养基 (肉汤培养基，鉴定细菌)、马铃薯葡萄糖琼 培养和驯化，得到6种不同的菌液，结合PCR一165r0 分子生物 脂培养基 (PDA，鉴定放线菌和真菌)和乳酸细菌培养基 (MRS)， 学鉴定技术，分析其中微生物的群落差异。结果表明：在铁渗透反 对降解苯和甲苯的菌液进行初步筛选，通过革兰氏染色结果，对微 应格栅 (FeO—PRB)下游的水化学环境中，降解苯和 甲苯的微生物 生物进行初步分类，再通过纯化培养，得到不同种类微生物的菌体 优势群落减少，芽孢杆菌属和 自养黄色杆菌属是其中的优势群落。 并提取 DNA，再通过 PCR反应得到足够的DNA样品，进行样品 地下水地球化学环境变化是微生物落群减少的主要因素。 DNA测序 (测序送上海生工实验室完成)。 关键词 生物降解 苯 甲苯 生物群落 铁渗透反应格栅 1-2．1微生物纯培养 在培养基涂布结束后，将培养基放在密封的装有厌氧产气袋 地下水中氯代烃与石油类 (主要是BTEX)混合污染羽治理的 的容器中进行培养。培养结束后，选择刮取培养基上菌落生长较好 难点在于这两类物质的性质不同。氯代烃易于被铁化学还原而 的微生物菌体提取DNA。 BTEX对铁具有很强的化学惰性；BTEX易于好氧生物降解而氯代 1_2．2细胞裂解和DNA抽提 烃很难 自然生物转化 l【I，对不同污染区的氯代烃和BTEX混合污染 将刮取的菌体，放到装有约5mL灭菌水的离心管中，涡旋振荡 羽的自然降解研究表明12-31。这两类污染物在原位很难同时被生物 5min，12000rm／in室温离心5rain，弃上清液。在沉淀中加约 10mL 转化或降解，地下水中的溶解氧水平通常是生物降解的主要限制 TENP缓冲液，涡旋振荡 5rain，12000rm／in离心5min，收集菌体沉 因素。BTEX在铁还原环境下也可被生物降解 ，因此可将 淀。采用珠式细胞破碎器机械破壁2．5min，以充分释放细胞内的 FeO—PI／B与厌氧生物降解技术联用，先去除氯代烃再使BTEX生 DNA。 物降解修复该类混合污染羽。但在FeO—PRB下游，地下水化学环境 细胞裂解后，在室温下 12000rr／ain离心5min后取上清液，用 发生显著变化，会影响微生物的生长代谢。本文以苯、甲苯、苯和 甲 等体积的PCI混合液抽提 1次后离心 (4cc，13000 g，15min)；再 苯为碳源，分别采用地下水、加入铁和TCE浸泡过的地下水进行微 用 cI混合液抽提 1次后离心 (4~C，13000 g，15rain)；取水相于 生物的培养和驯化，得到不同的菌液，结合PCR一16SrDNA分子生 10mL离心管中，加入 0．6倍体积预冷的异丙醇，上下颠倒混匀，放 物学鉴定技术，研究FeO—PItB下游降解苯和甲苯的微生物群落结 置在一2O℃冰箱内沉淀 lh或过夜，待沉淀后再离心 (4~C，14000 构的分布，为该联合技术的发展提供指导。 Xg，15rain)，弃上清液。用