大鼠局灶脑缺血基质金属蛋白酶2的表达.docVIP

大鼠局灶脑缺血基质金属蛋白酶2的表达 作者：张树平 王桂花 王垣芳 姜文国 栾海云 【摘要】 目的 研究大鼠局灶脑缺血后基质金属蛋白酶2（Matrix metalloproteinase2, MMP2）在不同时相的表达，探讨MMP2与缺血性损伤的关系。方法 制作大鼠自体血栓性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型，在不同时点用免疫组化染色观察MMP2表达情况，并与假手术组进行对照。结果 缺血6 h后MMP2表达很少，24 h表达上调，5 d达最高水平。MMP2主要表达在星形细胞、巨噬细胞。结论 缺血后出现MMP2表达的上调，影响缺血性卒中的转归。 【关键词】 大脑中动脉闭塞；免疫组化；缺血性脑损伤 【Abstract】 Objective To explore the induction of matrix metalloproteinase2 expression at different time after transient focal cerebral ischemia in order to understand the relation between MMP2 and tissue injury in ischemic brain. Methods Rats were subjected to embolic focal ischemia by placing homologous blood clots into the middle cerebral artery The expression of matrix metalloproteinase2 of all the groups was analysed by immunohistochemistry at 6 h,1 d,2 d,3 d,4 d,5 d after ischemia and compared with sham operation.Results The expression of MMP2 at 6 h after ischemia was very limited, then significant upregulation at 24h. MMP2 activity reached maximum levels by 5d.The expression of MMP2 was detected in astrocytes and macrophages.Conclusion The study indicated that MMP2 was upregulated，which possibly had affection to the development of stroke. 【Key words】 cerebral ischemia,matrix metalloproteinases,immunohistochemistry 缺血性脑损伤的原因之一是局部发生炎症反应，最早是白细胞粘附内皮细胞，继而血脑屏障遭破坏，炎性细胞侵入缺血受伤脑组织。血脑屏障对维持神经组织内环境的相对稳定十分重要，研究发现脑缺血及再灌后出现MMPs的表达增加，尤其是MMP2和MMP9活性增加，与脑微血管通透性、血脑屏障(BBB)通透性、BBB的崩溃、炎性细胞侵入和脑水肿明显相关。使用合成的MMPs抑制剂可以不同程度地抑制以上改变。故本研究以大鼠为对象，研究短暂大脑中动脉闭塞(MCAO)诱导的局灶脑缺血后MMP2不同时相的表达，探讨MMP2在局灶性脑缺血中的作用。 1 材料与方法 1.1 实验动物及分组 由山东医科大学新药评价中心动物部提供的Wistar雄性大鼠42只, 鼠龄2个月左右,体重300~400 g,随机分为7组，每组各6只：①假手术组；②缺血6 h组；③缺血1 d组；④缺血2 d组；⑤缺血3 d组；⑥缺血4 d组；⑧缺血5 d组。 1.2 主要试剂来源 MMP2单克隆抗体，内源性过氧化物酶阻断剂，生物素标记二抗工作液，辣根酶标记链霉卵白素工作液，正常山羊血清,DAB显色试剂盒，多聚赖氨酸防脱片剂，抗体稀释液, OTC（冰冻切片包埋剂），以上试剂均来自北京中山生物技术有限公司。 1.3 大鼠自体血栓MCAO的制作 采用毛春等在Busch法［1］基础上引进和改良的方法［2］制作大鼠自体血栓MCAO模型。 1.4 假手术组的制作 将大鼠用10%水合氯醛麻醉，于颈正中切开皮肤后，逐层分离以暴露右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉和翼腭突动脉，将颈外动